海洋天然产物Manoalide药理作用的研究进展.doc

海洋天然产物Manoalide药理作用的研究进展 攀誊 海洋天然产物Manoalide药理作用的研究进展 山东省海洋药物科学研究所(266003)李青选 八十年代初期,抛自栖息于太平洋 西加罗林群岛附近水域水深2O至35米处的 海绵I.~ffarwlla1xtTio~中提取出一种二倍半 萜烯类物质称之为Manoalide(MLD)D].体外 试验证实,MLD具有显着的抗菌活性,对脓 链霉菌及金黄色葡萄球菌的活性尤为明显. 此后,Johnr叫b[】.]自Palau岛附近水域之同 类海绵中亦分离出MLD并发现当MLD剂量 为50rag/幻时,在苯醌试验中对小鼠有明显 的镇痛作用.鉴于MLD结构新颖且与已知的 镇痛药物如吗啡,内啡肽,水杨酸盐及吲哚 美辛等在结构上无相关性,引起了国外学者 对其进行深入研究的兴趣.近十年的研究进 展表明,MLD对磷脂酶A2,磷脂酶,鸟氨 酸脱羧酶和醛糖还原酶等多种酶有抑制作 用,对细胞.+通道有阻滞作用,对环氧酶 及脂氧酶具有双重抑制作用,是一种具有重 要开发研究价值的海洋天然产物. 药理作用 1.对磷脂酶的抑制作用 1.1对磷脂酶A2的抑制作用 Bennett研究了MLD对四种纯化的细胞 外磷脂酶A2(PLA2)的抑制作用[2].结果表 明,MLD对蜂毒PLA2活性最强,Ics0值为0.12 pmol/L,对猪胰PLAz活性最差,Ic50值为 30pmol/L.而对响尾蛇毒PLA2及眼镜蛇毒 PLA2的ICso值分别为0.7及1.9.umol/L. Glazer总结了MLD对蜂毒PLA2的抑制作用 的四个特点[.:(I)MLD对PLA2的抑制呈 浓度依赖关系.当MLD≥4.0pmol/L时对 中国海洋药物垛志1991年夸I53期(总第39期) PLA2活性完全抑制,而其Ic50值则为0. 051Jmol/L,在双倒数图象中(double—recipro_ calplot)两者关系为非线型,表明MLD的作 用不遵循典型之Michaelis--Menten动力学原 理;(ir)MLD在微摩尔(1imo1)浓度范围内, PLAz活性丧失与时间的关系不呈直线型, 提示两者不循从伪一级动力学(pseudo--first — orderkinetics)原理;(Ⅲ)MLD的作用为 pH依赖性而非钙依赖性.MLD在pH6.0— 7.0之间迅速抑制PLAz,pH8时活性最强; 当ca.+在0—12nmol/L范围内对0.5~tmol/L 之MLD的作用无影响;(IV)对PLA2的抑制 为不可逆性.D—PLA,,复合物在稀释100 倍时,或在4℃透析24h,PLAz活性并不逆 转.在此基础上,Glazer进而研究了MLD抑 制蜂毒PLAz的动力学以及所必需之肽段和 氨基酸残基[..Glazer发现,MLD不仅能抑 制蜂毒PLA2活性,而且可与PLA2形成生色 团(Chromophore,),max437nm).MLD的结构 可分为两部分:一部分是羟丁烯酸内酯(hy— droxybutenolide),一部分是吡喃(pyraa).生 色团的形成系羟丁烯酸内酯部分与嗜核基 团发生反应所致;而对PLAz的抑制作用则 是吡喃与另一个嗜核基团反应所致.据此, Glaser推测MLD与蜂毒PLA2的作用分两个 阶段,最初是MLD中的羟丁烯酸内酯部分 与一个嗜核基团反应;而对PLAz的不可逆 抑制则是吡喃部分与另一个嗜核基团的反 应结果.利用生色团为标志可阐明MLD与 PLA的结合部位.业已证实,MLD与PLA2 一 级和三级结构中的两个Lys残基的e一氨 23 基发生作用,所需最佳肽段为L?或Lys—x — x—Lys. deFreitas采用大鼠膈神经标本及生化 测试方法研究了MLD对银环蛇毒液PLA2 的抑制作用[s-.研究结果表明,MLD与纯 PLA2培养lIl,可使PLA2对磷脂酰胆碱水解 作用抑制75%.在双倒数图象中二者呈直线 关系且MLD的KD值为4.8x10_.M,表明 MLD为强力的PLA2抑制剂 鉴于MLD有抑制佛波酯(phorbol— ester)致鼠耳炎症的活性,为探讨局部应用 MLD的抗炎活性与对细胞内PLA2活性抑制 的关系,Bennett研究了MLD对细胞内PLA2 的抑制作用[引.Bennett采用胞浆分离术,分 离出豚鼠子宫,肺以及大鼠嗜碱细胞白血病 细胞(BRL～1)和平滑肌样细胞株(BC3H)内 的PLA2,并测得活性范围为1.2一 d7Opn1oles/n1g/Inin.结果表明,MLD对细胞 内PLA2的Ic5o值比MLD对蜂毒PLAzICs0值 高200倍.MLD对小鼠耳匀浆中PLA2有抑 制作用,其IC5o为60/amol/L比MZ,D抑制佛 波酯致鼠耳炎症EDso值高2.5倍.可