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奶牛球虫卵囊检测方法 26中国兽医杂志2008年(第44卷)第6期 奶?牛?球?虫?卵?囊?检?测?方?法 赵其平,姜连连,韩红玉,董辉,黄兵,王鑫,韩静芳 (中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室,上海徐汇200232) 中图分类号:$855.9文献标识码:B文章编号:0529—6005(2008)06—0026—02 牛球虫病是由牛球虫寄生在牛小肠下端和整个 大肠的上皮细胞内引起的以出血性肠炎为特征的寄 生性原虫病,在多雨季节,长期在低洼,多沼泽的草 甸上放牧,或牛舍潮湿,均易引起此类疾病的发生, 主要发于犊牛.该病对养牛业的危害较大,据报道 美国养牛业每年因球虫病导致的经济损失达几亿美 元口].我国牛球虫病发病率可高达87.5,危害十 分严重].该病的诊断还主要是根据临床症状和剖 检变化以及粪检卵囊来确诊L4]. 目前,球虫粪便检查以虫卵漂浮法为主,这种方 法主要应用饱和食盐水来漂浮比重小的线虫卵,绦 虫卵和原虫卵囊.但有时也采用比重更大的饱和溶 液浮集比重较大的虫卵,如用硫代硫酸钠饱和溶液 浮集猪的后圆线虫卵].国内外通常采用改良麦克 马斯特氏计数法(McMasterSmethod)粪检牛球虫 卵囊_5.],所选用的漂浮液有饱和盐水,饱和硫酸镁, 37硫酸锌,SheatherS液,检测粪样量有10g, 2Og,5Og,没有统一的粪便中牛球虫检测标准. 作者在对上海地区奶牛球虫病流行病学调查 中,采用改良麦克马斯特氏计数法,选取了目前寄生 虫粪检普遍使用的6种漂浮液和4个检测剂量进行 了比较,选择一种最佳的漂浮液以及筛选一个最佳 的粪便检测剂量,以建立一种简便,标准,适用于检 测牛粪便中球虫卵囊的方法. 1材料与方法 1.1漂浮液6种常用漂浮液:饱和盐水,饱和硫 酸铵,饱和硫酸镁,饱和硝酸钠,甘油饱和盐水和 SheatherS液.其配制方法分别为:(1)饱和盐水 取400g食盐加人1000mL水中加热溶解,冷却备 用,比重为1.2.(2)饱和硫酸铵取767g硫酸铵加 人1000mL水中加热溶解,冷却备用,比重为1.22. (3)饱和硫酸镁取920g硫酸镁加人1000mI水中 加热溶解,冷却备用,比重为1.35.(4)饱和硝酸钠 取l000g硝酸钠加人1000mL水中加热溶解,冷 却备用,比重为1.32.(5)甘油饱和盐水取500mL 甘油与500mL饱和食盐水等量混合,比重为1.23. (6)SheatherS液取1280g蔗糖加人1000mL水中 收稿日期:2007—02—01 项目基金:上海市科技兴农重点攻关项目资助(2004—12—3) 作者简介:赵其平(1969一),男,兽医师,中专,从事球虫生物学研 究,电话:021E-mail:zqp196905@yahoo.eom.c 通讯作者:黄兵,电话:021E—mail:Huangbing232@ I63.corn 溶解,按总量的0.5加入苯酚,比重为1.26. 1.2粪样取自上海市郊某奶牛场,40头奶牛肛 门采集粪便,牛球虫镜检阳性的粪便用于本次试验. 1.3漂浮液比较试验取新鲜阳性粪便分成6份, 每份5g,置于烧杯中加入适量水搅匀,经60目铜 丝网或纱布过滤,滤液移入离心管,2500r/min离 心10rain,倾去上清液,沉淀加入少量水,混匀,转 入烧杯中,加水至50mI.充分混匀后取2mL至 l0mL离心管中再加入4mL不同漂浮液,充分混 匀,用吸管吸取上述混悬液注满麦氏记数板,静置 10rain,显微镜下记数,结果以克粪便卵囊数(oPG) 来显示,每个粪样重复1次,取平均数为最终的OPG. 每次试验重复进行10个不同的粪样,以漂浮效果较 好的3个漂浮液进行不同粪样量的比较试验. 1.4粪样量比较试验取新鲜阳性粪便分成3份, 每份粪便各取2g,5g,10g,15g,分别置于50mL 烧杯中,加入适量水轻轻搅匀,经60目铜丝网或纱 布过滤,将滤液移入离心管,2500r/min离心10 rain,弃去上清液,沉淀加人少量水混匀,将它移人 一 个烧杯巾,分别加水至2OmL,5OmL,1()(]mL, 200mL,充分混匀,取2mL至10mL离心管中,再 加人4mL不同漂浮液,混匀,用吸管吸取上述混悬 液注满麦氏记数板,静置10rain,显微镜下记数. 结果以克粪便卵囊数(OPG)来显示,每次重复1 次,取平均数为最终的OPG.每次试验重复进行10 个不同的粪样,确定一个最佳的漂浮液和检测剂量. 2结果与分析 2.16种漂浮液的效果比较对6种漂浮液进行 了10份粪样的检查,每份粪样用6种漂浮液各漂浮 检查两次,其检测结果见表1.统计学结果表明:样 品1用饱和盐水与甘油饱和盐水漂浮后检测的 OPG值差异不显