用固相红细胞吸附法检测血小板抗体及交叉配合试验的探讨.doc

用固相红细胞吸附法检测血小板抗体及交叉配合试验的探讨 ,红佣胞,血,l横疣体 墨学捡验杂志筹7卷第2期992年B月 In王1勺用相红细胞吸附法检测m小板抗体及交叉配合试验的探讨 韩5-风张洪涛郝军刘英薛玉祥王凯南(解放军304医院血库) 一— , 1 文献报道,血小板表面有三种同的执 原结构,即红细胞抗原系统ABH,白细胞 抗原系统HLA及血小板所特有的几个抗原 系统PIA,rlE,KO,DUZ0,Bak等. 长期输血或输小板的病人,常因这些复杂抗 娘l起的同种免疫而导致输入的血小板快 速破坏或其它严重的输血反应.确效地检出 l~t/b板抗体,为患者选择输注配合的血小 板,对提高输血小板疗效,避免输血反成至 关重要.为此,我们选用一种简单,速 敏感的血小板抗体检测及交叉配台技术—— 固相红细胞吸附法(Solidphasercd bl0Odcellauhereiice,SPRCA)并对 某些技木环节进行了改良,现报道如下. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1仪器:囤产LD25—2型离心机}0G 孔U型塑料反应板. 1.1.2试剂:兔抗人IgGEDrrAl1l 醛,El制抗血小板抗体,低离子强度杵液 (LISS),指示J:细胞筹. 1.1.3血液标本t本院及解放军301等6家 医院临床输血病人,绝大多数为m液病患 开,输血次数不少于l0次 1.2方法 1.2.196孔塑料反应板的处j按Catt 等方法进行血小板固相化.首先将血小 板抗体用蒸溜水稀释到大约20ug/ml,向塑 料反应板孔内加入该稀释液100ul,4lc冰 箱保存,使用前用生强盐水洗3～4次. 1.2.2血小板层制备;随机抽取L2{~70 型人全血与3的EDTA抗凝剂7:1混台, L22000rlmin速度离心10min,获富含血小 板血浆(PRP),将PRP分剐加入上述已 处弹过的反应板孔内,每孔2～3滴,离心反 应板900r/minSmin,使形成捌血小板 1毕层. 1.2.3血小板抗体测定;用生坪盐水轻沈 反应板6次,加入4%甲醛2谪,温赦 10min,去甲醛液,再用生理盐水洗6扶, 加入经玲抗体吸收处理后的被检血清L滴, LISS3滴,混匀后置37℃孵化30min~fij生 群盐水洗板5次,加Z.0.4%的抗人IgG致敏 指示红细胞1滴,将板2200r/min离blIllin 后判读结果. 1.2.4交叉配台试验;方法同上,把与 受者ABO相台的供者血小板固定于反应板 孔内,与受者血清反应,选出反应阴性供背, 单采血小板输注 1.2.5试验系统的质控与结果判谈:本试 验分别用不含抗体的AB血清和已知含隋抗 血小板抗体血清作阴性和阳性对照反应结 果,指示细胞均匀复盖在固定的血小板单层 上为阳性,指示细胞聚集孔底巾央形成细胞 扣为阴性. 2结果与分析 2.192名长期输血或输血小板患者,用此 法分别作血小板抗体检查和交叉配合试验, 结果如衷1. 致作者:本刊创刊以来,受到越来越多的作者的热睹支持.使我们一直感到难以回报的魁现 实条件所限,致使每年有午H当一挝质量较好的文章得不到交流.为此,本刊拟从1993年起缩 小字号,j{Ij扩大刊物容景,剐也需要请作者和我们紧密俞作,稿件力求精悍,篇幅不宜 过长. 表1SPRCA法血小扳抗体和交叉配台试验结果 抗体筛选 病例敫 交叉相容次数 交叉不相容次敬 合计 l03 眦性 58 273(97.8) 6(2.2Yo) 279 阳性※※ 9 21(3.71) 544(96.29) 565 ※患者血清与12份()型血小板中部分发生阳性反应 ※※患者血清与】2份O璎血小板12份都}n现阿1性反应. 结果妊示,用此浊共测得机体阳性34 例,其中25倒只列12份O型j6【小板部分发生 阳性反应,9侧则全有反应,他们与供者的 相容性分别为37.2%,3.71.这结果夜 [1月,前者有同种免疫,但辽不Jh泛j后者已 有泛的同种免疫,要为这样的患者选择配 ☆的衄小板输血十分匪l难.抗体阴性的58 例,与绝大多数供者(97.8%)是槲容的. 少数(2.2)不配合者可能与抗体作用可 供者血小板上的低频抗原有关,而遮种低频 抗原在用抗体筛选的12份0型血,』,板上不 存在. 2.2输SPRCA法配型血小板疗效评价.为 37倒经术法或其它医院用别的方法证实有血 小板抗体的病人做血小板交叉配合试验,分 别输入配台与不配合血小板进行对比观察, 疗效以输后20/b时的修正血小板计数增值 (CCI)表示,结果见袭2: 表2交叉相台与不相台血小板输后20小时CcI的比较 组别 交叉枷台 交叉不相合 次数 58 l7 CCI/~I(.7-±) 32550±1l475.027 647.059±4372.323 , lt;0.001 结果显示;右.58次供受者