细胞工程--C4.2-细胞培养液.ppt

溶液 消毒或灭菌 保存 氨基酸 过滤 4℃ 抗生素 过滤 -20℃ 牛血清白蛋白 过滤（用重叠式过滤器） 4℃ 药物 过滤 -20℃ 生长因子 过滤 -20℃ 盐溶液（不含葡萄糖及二价离子） 高压灭菌 室温 HEPES 甘油 EDTA DMSO 溶液 消毒或灭菌 保存 氨基酸 过滤 4℃ 抗生素 过滤 -20℃ 牛血清白蛋白 过滤（用重叠式过滤器） 4℃ 药物 过滤 -20℃ 生长因子 过滤 -20℃ 盐溶液（不含葡萄糖及二价离子） 高压灭菌 室温 HEPES 高压灭菌 室温 甘油 EDTA DMSO 溶液 消毒或灭菌 保存 氨基酸 过滤 4℃ 抗生素 过滤 -20℃ 牛血清白蛋白 过滤（用重叠式过滤器） 4℃ 药物 过滤 -20℃ 生长因子 过滤 -20℃ 盐溶液（不含葡萄糖及二价离子） 高压灭菌 室温 HEPES 高压灭菌 室温 甘油 高压灭菌 室温 EDTA DMSO 溶液 消毒或灭菌 保存 氨基酸 过滤 4℃ 抗生素 过滤 -20℃ 牛血清白蛋白 过滤（用重叠式过滤器） 4℃ 药物 过滤 -20℃ 生长因子 过滤 -20℃ 盐溶液（不含葡萄糖及二价离子） 高压灭菌 室温 HEPES 高压灭菌 室温 甘油 高压灭菌 室温 EDTA 高压灭菌 室温 DMSO 溶液 消毒或灭菌 保存 氨基酸 过滤 4℃ 抗生素 过滤 -20℃ 牛血清白蛋白 过滤（用重叠式过滤器） 4℃ 药物 过滤 -20℃ 生长因子 过滤 -20℃ 盐溶液（不含葡萄糖及二价离子） 高压灭菌 室温 HEPES 高压灭菌 室温 甘油 高压灭菌 室温 EDTA 高压灭菌 室温 DMSO 本身无菌，分装后使用 4℃ 动物细胞体外培养 营养条件 1. 氨基酸 2. 碳水化合物 3. 无机盐 4. 维生素 5. 促生长因子 6. 其他成分 环境条件 1. 培养用水 2. 培养温度 3. pH 4. 气体条件 5. 渗透压 6. 无毒、无污染 动物细胞体外培养的营养条件 1. 氨基酸：是细胞合成蛋白质的原料。培养液必须含有12种必需氨基酸，此外还需要谷氨酰胺，是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培养液内。已含谷氨酰胺的培养液在4℃冰箱中储存2周以上时，还应重新加入原来量的谷氨酰胺。 动物细胞体外培养的营养条件 1. 氨基酸 2. 碳水化合物：是细胞生长主要的能量来源，不论是有氧氧化还是无氧酵解，六碳糖是主要能源。此外六碳糖也是合成某些氨基酸、脂肪、核酸的原料。 3. 无机盐 4. 维生素 5. 促生长因子 6. 其他成分 动物细胞体外培养的营养条件 1. 氨基酸 2. 碳水化合物 3. 无机盐：在帮助细胞维持渗透压平衡和调节细胞膜功能等方面有重要作用。另外，它们还是某些维生素、激素和酶形成过程中不可缺少的原料，如许多酶都以Mg2+作为辅助因子。 4. 维生素 5. 促生长因子 6. 其他成分 动物细胞体外培养的营养条件 4. 维生素：是维持细胞生长的必不可少的有机化合物，在细胞代谢中主要起着辅酶、辅基的作用，可分为脂溶性维生素和水溶性维生素两大类。脂溶性维生素有维生素A、维生素D、维生素E、维生素K等；水溶性维生素有维生素C和维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素B12等。在细胞培养中，尽管血清是维生素的重要来源，但在许多培养基中都添加生物素、叶酸、烟酰胺、泛酸、吡哆醇、核黄素、硫胺素、维生素B12以适合更多的细胞系生长。 动物细胞体外培养的营养条件 5. 促生长因子：已证明各种激素、生长因子对于维持细胞的功能、保持细胞的状态（分化或未分化）具有十分重要的作用。如胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，用量为1~10 U/mL，对很多细胞的增殖生长均有促进作用。有些激素对某一类细胞有明显促进作用，如氢化可的松可促进表皮细胞的生长，泌乳素可促进乳腺上皮细胞生长的作用等。血清是提供促生长因子及激素的重要来源，因此这方面的营养需要可通过在培养基中添加5%~20%的小牛血清来满足。 动物细胞体外培养的营养条件 1. 氨基酸 2. 碳水化合物 3. 无机盐 4. 维生素 5. 促生长因子 6. 其他成分：现已查明，细胞生长中，除需钾、钠、钙、镁、氮和磷等基本元素外，也需微量元素，如铁、锌、硒等。 动物细胞体外培养的环境条件 1. 培养用水：体外培养细胞对水质的要求非常高，需使用新鲜的及不超过两周的三蒸水。 2. 培养温度：人体细胞培养的标准温度为36.5℃±0.5℃，偏离这一温度范围，细胞的正常代谢会受到影响，甚至死亡。培养细胞对低温的耐受力较对高温强。 3. pH：动物细胞生长大多数需要轻微的碱性条件，培养的最适pH为7.2~7.4，当pH低于6或高于7.6时，细胞生长会受到影响，甚至导致死亡。 PH 大多数细