细胞生物学1-13章课件-(4).ppt

二. 细胞分离和细胞培养 1.细胞分离（ cell separation） (1) 制备单一细胞悬液 组织 EDTA 细胞间连接 消化 胰酶 细胞外基质 多细胞悬液 (2) 分离不同类型细胞 A. 离心 （centrifugation） 大小 密度 形状 小 轻 不规则 大 重 圆形 B. 细胞的黏附性 D. 流式细胞仪(flowcytometer,FCM) 荧光激活细胞分选仪（FACS） 原理： 用带有荧光的特异抗体标记待分离的细胞，然后在流式细胞仪中选出标记细胞。 应用： 细胞分选: 1cell in 1000 5000 cells/sec E. 激光捕捉显微切割技术(Laser capture microdissection,LCM) 原理： 应用：从组织切片中获取单一细胞 2. 细胞培养 （Cell culture） 从活体组织分离出特定细胞,在一定 的条件下进行培养,使之能够继续生 存、生长以至增殖的一种方法。 in vivo：用动物做实验 in vitro：用培养细胞做实验 (1) 细胞培养的条件 A .固体表面 B .培养基、血清 C .无菌、抗生素 D. 37℃、5％CO2 、95～100％湿度 (2)细胞培养的不同阶段 原代培养(primary culture) 传代培养(secondary culture) 原代培养(primary culture):直接从生物体获取细胞进行培养。 传代培养(secondary culture)：将原代培养的细胞连续以一定 比例扩大培养。 细胞系(cell line) ：原代培养细胞成功传代即为细胞系。 细胞株（cell strain） ：从培养细胞中筛选出的具有特定性 质或标志的细胞群。 　　功能：保持原分化特性 　　形态：多不保持原有细胞形态 　　 成纤维样细胞 　　上皮样细胞 （１）变异细胞 　　可无限增殖、传代 　　细胞系（NIH3T3: 1963年由小鼠成纤维细胞建立） 　接触抑制:细胞系在固体表面生长繁殖,在互相接触 　　后,即培养皿长满一单层细胞后停止分裂、增殖。 （２）由癌细胞建立的“癌细胞系” 特点:可在培养皿中以极高的密度增殖， 没有扩展的余地时,可向空间生长。 （３）正常细胞经诱导建立的“转化细胞系” 肿瘤病毒 放射线 化学致癌物 用癌基因转染正常细胞 (3)细胞克隆（Cell cloning） 克隆（clone）：指由同一个祖先细胞通过有丝分裂产生的遗传性状一致的细胞群。 (4)细胞融合 ①定义 在自然或人工条件下，使二个或二个以 上细胞合并形成一个细胞的过程。 ③应用 A.细胞核和细胞质间的相互作用 鸡红细胞 组织培养细胞 融合 红细胞开始合成RNA,并进行DNA复制 B.膜蛋白流动性 D.单克隆抗体制备（monoclonal antibody） 单一的抗原 一个B淋巴细胞 特异性抗体 单克隆抗体定义: 从单个B淋巴细胞繁殖的细胞克隆可以得到均质的抗体叫单克隆抗体。 制备过程：1984年Nobel奖 B淋巴细胞＋“不死的”小鼠骨髓瘤细胞 杂交细胞（杂交瘤）