课题3 分解纤维素的微生物的分离.ppt

P30练习：2：学完这个专题后，你能否总结出分离培养微生物的一般方法？请用流程图表示。 （五）挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C－ 370C培养，可获得纯培养。 本课题对分解纤维素的微生物进行了初步的筛选，但是这只是分离纯化的第一步。为确定得到的是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验，发酵方法有液体发酵和固体发酵两种。纤维素酶的测定方法一般是对纤维素酶分解滤纸等纤维素后所产生的葡萄糖进行定量的测定。 三、课题延伸 发酵产纤维素酶的实验 液体发酵 固体发酵 （纤维素酶） 滤纸等纤维素 葡萄糖：定量测定 发酵 1、你选用了哪种实验用品来分离纤维素分解菌?取样环境有什么特点？作出选择的理由是什么？ 四、结果分析与评价 腐殖土、多年积累的枯枝败叶、埋入土壤10cm经30d左右腐烂的滤纸；富含纤维素分解微生物；此环境纤维素分解菌浓度高。 2、培养基有杂菌污染吗？你是否分离到了能够产生透明圈的微生物？它们是纤维素分解菌吗？ 如空白对照培养基无菌落则说明培养基无污染，否则有污染；分离得到的有透明圈的菌落不一定就是，还要进一步进行发酵产纤维素的实验以证明其真的分解纤维素产生了葡萄糖，并可对葡萄糖作定量测定。 3、比较你的分离结果与其他同学有什么不同？分析产生不同结果的原因？ 四、结果分析与评价 由于取样环境的不同，操作过程的差异，不同同学实验结果可能会有差别；如果与大家的结果不同应分析原因： （1）通过对照实验检验培养基是否污染： （2）操作过程是否进行了无菌操作且保证无杂菌污染 （3）选择培养是否使纤维素分解菌浓度提高 （4）梯度稀释的稀释度是否合理 （5）产生的有透明圈的菌落是否就是纤维素分解菌 五、操作提示 （一）复习微生物技术 实验前，请先复习课题1、2中学习过的方法：主要包括 1、培养基制备：计算、称量、溶化（调ＰＨ并分装）、灭菌、 　　　　　　　　倒平板（液体培养基不用倒平板）； 2、无菌操作技术：环境、操作台、衣服消毒；培养皿、试管、吸管等玻璃仪器、金属用具干热灭菌；接种环、试管口等灼烧灭菌；培养基等高压蒸汽灭菌；操作过程在酒精灯火焰周围； 3、稀释涂布平板法：按微生物浓度梯度稀释，用涂布器涂布； 4、选择培养基的作用：选择培养目的微生物，抑制其他微生物 5、土壤取样：用铁铲取土样装入信封，操作在酒精灯火焰周围，（铁铲和信封已灭菌） 五、操作提示 （二）选择培养的操作方法 土样 如样品中纤维素分解菌浓度较高，选择培养可不进行 锥形瓶：30ml选择培养基 固定在摇床上 一定温度下 振荡培养1～2天 培养液变浑浊 转移到另外一瓶新鲜的选择培养液中 培养液变浑浊 同以上条件 吸取一定培养液（如5ml） 可多次循环选择培养提高纤维素分解菌浓度 课后练习 土壤取样 选择培养 梯度稀释 取样涂布：将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 挑选单菌落 发酵培养 专题2 :微生物的培养与应用 课题目标 1、简述纤维素酶的种类和作用； 2、从土壤中分离出分解纤维素的微生物； 3、讨论这类微生物的应用价值； 研究对象：分解纤维素的微生物 课题重点、难点 重点：从土壤中分离出分解纤维素的微生物； 难点：从土壤中分离出分解纤维素的微生物； 课题背景 1、纤维素：是一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖。 2、可被土壤微生物分解利用 纤维素 纤维素酶酶：C1酶、 Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 3、分解纤维素的微生物的利用： 使人们能够利用秸秆等废弃物发酵产生酒精，用获得的纤维素酶处理服装面料等。 纤维素 纤维素酶酶：C1酶、 Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 一、基础知识 （一）纤维素与纤维素酶 （二）纤维素分解菌的筛选 （一）纤维素与纤维素酶: 1、纤维素：一种由葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，是地球上含量最丰富的多糖。 棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物、木材、秸秆也富含纤维素，许多商品纤维素都是由天然纤维素制得：如水溶性的羧甲基纤维素钠（ＣＭＣ－Ｎa）、不溶于水的微晶纤维素等 （一）纤维素与纤维素酶: 2、纤维素酶：一种复合酶，至少包括三种组分 C1酶（外切酶）：又称纤维二糖水解酶，作用于纤维 素的结晶区或小片段纤维素，从末端切掉 两个分子葡萄糖产生纤维二糖； Cx酶（内切酶）：作用于无定型的纤维素区域，使纤 维素断裂成片段； 葡萄糖苷酶：将纤维二糖水解成葡萄糖 纤