糖原的显示PAS反应.ppt

糖原的显示(PAS反应) 山东师范大学生命科学学院 邢维贤 实验目的 实验原理 实验用品 实验方法与步骤 实验结果 实验报告 目的要求 通过PAS反应，了解糖原显示的基本原理、方法以及糖原在细胞中的分布。 基本原理 糖原由D-葡萄糖的分支或直链组成，在肝和肌肉最丰富。过碘酸是一种强氧化剂，能将葡萄糖中乙二醇基（CHOH-CHOH）氧化成二个游离醛基（—CHO），游离醛基与Schiff ‘s试剂反应生成紫红色产物，颜色深浅与多糖含量成正比。 由于单糖在固定、脱水和包埋等组织化学操作过程中被抽提掉，故一般组织标本上所能显示的糖类主要是多糖，包括糖原、粘多糖、粘蛋白、糖蛋白和糖脂等。因此要确定此红色物质是否糖原还需要同时进行对照实验。糖原可被唾液淀粉酶水解，先用唾液淀粉酶作用再进行PAS显色，若反应为阴性，则表明是糖原，反之则为其他多糖。 实验用品 1．器材：石蜡切片机，盖玻片、载玻片、染色缸等． 2．试剂 0.5%过碘酸溶液；Schiff‘s试剂 3．材料：小鼠肝脏石蜡切片 切片经二甲苯和各级酒精复水后，入0.5%的过碘酸溶液中作用15分钟，取出后水洗。 注意：过碘酸的氧化是整个实验中最关键的步骤，过碘酸的作用时间与反应环境温度有关，当室温较高时，反应较快，过碘酸的作用时间应适当缩短，当室温较低时，反应较慢，过碘酸的作用时间应适当延长。 切片充分洗净后入Schiff‘s试剂中进行显色。作用15分钟左右，将切片取出水洗，为洗去非特异性着色，将切处理品入三级新配制的亚硫酸中进行冲洗，取出后水洗，镜检。 对照片的设置 为了确保实验结果的可信性，在实验中需设置阴性对照片。 对照片在复水后，用唾液淀粉酶37℃水解30—60分钟，取出后水洗，再入过碘酸处理。 实验结果 实验报告 绘图表示糖元在细胞中的分布情况； 在实验过程中，过碘酸处理能起到什么作用，它和Feulgen反应中HCl的作用有何异同？