第二十二章 常用分子生物学技术的原理及其应用.doc

第二十二章 常用分子生物学技术的原理及其应用 　 一、授课章节及主要内容：第二十二章 常用分子生物学技术的原理及其应用 二、授课对象：临床医学、预防、法医（五年制）、临床医学（七年制） 三、授课学时:本章共1节课时（每个课时为45分钟）。 四、教学目的和要求 讲授分子生物学常用技术的基本原理和主要用途，帮助学生理解分子生物学的基本理论和研究现状，深入认识疾病的发病机制以及了解新的诊断和治疗方法。 五、重点与难点 掌握核酸分子杂交和Southern印记的基本原理。掌握PCR的定义及PCR的工作原理。了解核酸序列分析.基因文库建立.疾病相关基因克隆与鉴定.遗传修饰动物模型的建立.生物芯片技术与蛋白质相关作用研究技术的原理及其用途。 六、教学方法及授课大致安排 本章教学共1学时。教授与自学相结合，启发与讨论相结合。 七、主要外文专业词汇 activation domain ,AD binding domain, BD blotting cDNA library clone DNA blotting DNA chip DNA microarray duchenne muscular dystrophy,DMD dystrophin embryonic stem cell functional cloning functional complementation assay gain-of-function mutation gene chip gene knock-out gene library gene targeting genomic DNA library immunoblotting in situ hybridization loss-of-function mutations nitrocellulose, NC Northern blotting polymerase chain reaction, PCR positional candidate gene approaches positional cloning position-independent candidate gene approaches prey or target protein protein chip Quencher, Q real time PCR reporter, R rescue reverse transcription PCR,RT-PCR Southern blotting subtractive hybridization transgene transgenic animal two-color fluorescent probe hybridization Western blotting yeast two-hybrid-system 　八、思考题 　　１.名词解释 　　 分子杂交　PCR　基因文库　基因芯片 　　２.试述分子杂交的基本原理。 　　３.试述PCR技术的基本原理。 　　４.cDNA克隆与基因组克隆有何不同？ 　九、教材与教具：人民卫生出版社《生物化学》第六版 　十、授课提纲（或基本内容） 概 述 Introduction 分子生物学理论研究的种种突破无一不与分子生物学技术的产生和发展息息相关，可以说两者是科学与技术相互促进的最好例证，即理论上的发现为新技术的产生提供思路，而新技术的产生又为证实原有理论和发展新的理论提供有力的工具。因此，了解分子生物学技术原理及其应用，对于加深理解现代分子生物学的基本理论和研究现状，深入认识疾病的发生和发展的机制，理解和应用不断出现的新的诊断和治疗方法极有帮助。基于此目的，本章概括介绍目前医学分子生物学中的一些常用技术。 第一节 分子杂交与印迹技术 Section one Molecular Hybridization and The Technique of Blotting 一、分子杂交和印迹技术的原理(principle of Section one Molecular Hybridization and The Technique of Blotting) 分子杂交是利用DNA变性与复性这一基本性质来进行DNA或RNA定性或定量分析的一项技术。分子杂交技术的原理主要涉及分子杂交特性、印迹技术、探针技术几个方面，其中分子杂交的概念在第二章已有详细描述，这里仅介绍印迹和探针技术。 （一）印迹技术 1975年，Edwen Southern提出了分子印迹（渍）的概念。即将琼脂糖电泳分离的DNA