医学微生物学-病毒总轮二.ppt

原则：特异、敏感、快速、简便 首先根据流行病学和临床特点，初步判断可能感染的病毒。然后根据可疑病毒的生物学特点、机体免疫应答和临床过程，以及病人当前所处的时机，确定实验诊断方法。 1、标本的采集与送检: 检查成败的关键。 2、标本采集：急性期标本 标本处理：使用抗生素 标本送检：冷藏、快速送检 血清学检查应采双份标 病毒的人工培养 必需在活细胞内增殖。 动物接种：早期对病毒生物学特性研究的主要方式，现仅限于研究病毒或毒株的致病性或为确切诊断病原体为病毒。 鸡胚接种 细胞培养 登革病毒对新生乳鼠的致病作用 1-3日龄乳鼠接种病毒 6日后，小鼠陆续出现体弱、弓背、行动迟缓等症状。 9-14 day，受精鸡胚 (embryonated eggs) ①绒毛尿囊膜接种 (allantocherion inoculation) ②尿囊腔接种 (allantoic cavity inoculation) ③羊膜腔接种(amniotic cavity inoculation)：流感病毒初次分离 ④卵黄囊接种 (yolk sac inocaulation) 是目前分离病毒及了解病毒生物学特性和病毒疫苗生产的主要工具。 原代细胞培养：来自动物或人组织直接用蛋白酶消化所获得的细胞，经培养后可贴壁或悬浮生长。对病毒易感性高，主要作为从标本中分离病毒的工具。 二倍体细胞株：在体外连续50-100代后仍保持其二倍染色体数目的单层细胞。 传代细胞株：可连续传代的细胞系或来自肿瘤组织或来自发生自动转化的原代细胞系。 1、增殖指征： 细胞变化 红细胞吸附 细胞代谢改变 Question 细胞感染病毒后会有哪些变化？ 1、细胞病变效应 (CPE)：细胞变圆、 聚集、坏死、溶解或脱落等； 2、多核巨细胞或称融合细胞：如麻 疹病毒作用于细胞膜，可使邻近 的细胞相互融合； 3、包涵体：如狂犬病病毒、麻疹病 毒等可在培养细胞中形成胞浆或 核内的包涵体； 细胞的变化 病毒包涵体的类型 流感或副流感病毒等感染细胞后，由于细胞膜上出现了血凝素，具有吸附脊椎动物 (豚鼠、鸡、猴等) 红细胞的能力，这一现象称红细胞吸附。 测定正粘病毒与副粘病毒的增殖。 若有相应的抗血清，则能中和细胞膜上的血凝素，红细胞吸附不再发生，称红细胞吸附抑制试验。 病毒感染细胞的结果可使培养液的pH值改变，说明细胞的代谢在病毒感染后发生了变化。这种培养环境的生化改变也可作为判断病毒增殖的指标。 2、病毒感染性的定量测定： 蚀斑测定； 50％感染量（LD50）或50％组织细胞感染量(TCID50)的测定法； 红细胞凝集试验； 检验标本 ? 杀灭杂菌(青、链霉素) ? 接种易感的动物→出现病状 鸡胚→病变或死亡 细胞培养→细胞病变 ? 鉴定病毒种型(血清学方法) 病毒分离成功 原理：用已知病毒抗原来检测病人血清中有无相应抗体，故须待病人感染后体内产生抗体时才能检出。 双份血清：采取患者急性期血清与恢复期血清，两次血清抗体滴度相差4倍以上时，才有诊断意义。 课堂小结一 1、机体对病毒的防御机制 3个层次；干扰素 2、病毒对机体的致病作用 2个层次；感染的类型 课堂小结二 1、病毒感染的检查方法 标本的采集与送检、快速诊断 2、病毒的分离培养 三种常用方法 复习思考题 1、病毒的持续性感染可分为哪三种？ 之间有何区别？ 2、简述干扰素的抗病毒作用。 3、如果发生了一起病毒性疾病，如 何确诊感染的是何种病毒？ 谢谢 thankyou 10.11 细胞致病作用(Cytopathogenic effect,CPE) 病毒在细胞内增殖引起细胞退形性变，表现为细胞皱缩、变圆、出现空泡、死亡和脱落。某些病毒产生特征性CPE，普通光学倒置显微镜下可观察上述细胞病变，结合临床表现可做出预测性诊断（表23-4）。免疫荧光（IF）法用于鉴定病毒具有快速、特异的优点，细胞内的病毒或抗原可被荧光素标记的特异性抗体着色，在荧光显微镜下可见斑点状黄绿色荧光，根据所用抗体的特异性判断为何种病毒感染。 * 红细胞吸附现象（Hemadsorption phenomenon） 流感病毒和某些副粘病毒感染细胞后24-48小时，以细胞膜上出现病毒的血凝素，能吸附豚鼠、鸡等动物及人的红细胞，发生