欧洲药典-2．6．12非无菌产品的微生物限度检查.doc

PAGE PAGE 2 2．6．12非无菌产品的微生物限度检查 (有活力的需氧菌总数的计数) 本附录给出了两种测试方法第一种给出与专论相符合的相关测试方法除非说明采用第2种测试。参照本章的内容采用第１种测试方法。考虑到申请上市许可的需要。第2种测试方法也是欧洲药典正式方法的组成部分。一旦相关部分修改，用第２种测试方法代替第１种。第二种方法为了与日本药局方和美国药典的要求一致 A .欧洲药典的方法 下述检验方法是对有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌数的计数检查。 这些试验设计主要用来检查样品是否符合药典对微生物限度的要求，用于这一目的时要遵守以下 指导原则，包括样品的抽样数选取及结果的解释。这些试验也可以用于药典中抗菌防腐剂效力的检验(5.1.3)。它们可进一步用来监测原料质量，药物制剂的微生物质量监测(5.1.4)。当用于这些目的时，例如生产者用于原料和／或成品的检测或者用于认证过程评价时，进行测试的方法包括抽取样品数及结果的解释是生产者和主管当局间协议中的事项。 检定应该在样品不会被污染的条件下进行。用来防止污染的预防措施必须不影响在试验中微生物 的检出。如果被检测的产品含有抗菌活性，它必须被充分中和，并证明所用的灭活剂是有效的和对微生物是无毒性的 本章描述了薄膜滤过法，培养板记数法测定有活力的需氧菌总数 当没有其它方法进行细菌计数时可用最大可能数法。方法的选择基于产品的性质及预期的微生物 数量这些因素。任何被选用的方法必须被适当地验证。当5．1．3章或5．1．4章联合应用时，可以使用平皿法(pour—plate)，表面涂布平皿计数法(surface—spread)及薄膜滤过法。 供试品的准备 抽样计划：抽样必须遵循明确的抽样计划。抽样计划由一批样品的数量，与不被接受的高污染产品相关的健康危险，产品的特性，预期污染水平等因素而定。除另有规定外，取10g或10ml 样品或制剂，按上述方法预处理。 从原料中或从制剂包装中随机地选取样品。根据样品(原料或制剂)的特性，必要时可从多个包装中取样，混合后，得到所需检品量。一个取样计划是否适用于样品的抽样方法的关键是样品均一性，因为样品的均一性关系到微生物的分布。被认可的三个抽样种类是： (1)可接受的样品，例如：每克或每毫升仅含少于m 个菌落形成单位的样品。在这里m 是相关章节 中的规定限度。 (2)边缘样品，例如：每克或每毫升所含菌落形成单位多于m个少于十倍m个的样品。 (3)缺陷样品，例如：每克或每毫升所含菌落形成单位超过十倍m个的样品。 水溶性产品 取1O克或10毫升样品溶解或稀释到pH一7．0的氯化钠一蛋白胨缓冲液或其它合适的 液体中。通常预先准备1：1O的稀释液，然而，由于产品的特性及所需要的灵敏度不同，也有可能稀释成其他的比例。如果该产品含有抗菌活性物质，应在稀释液中加入灭活剂。如果需要，调节pH值到7左右，用相同的稀释剂做进一步的1O倍稀释。 不溶于水的非脂溶性产品 取1O克(或10毫升)样品悬浮到pH一7．0的氯化钠一蛋白胨缓冲液(或另一种液体)中。通常预先准备1：1O的悬浮液，由于产品特点，也可能要更大体积的稀释。一种适用的表面活性剂，例如，加入lg／L的聚山梨酸酯8O，有助于湿润性较差的物质的悬浮分散。如果该产品含有抗菌活性物质，可在稀释液中加入灭活剂。如果需要，调节pH值到7左右，并且用相同的稀释剂做进一步的1O倍稀释。 脂溶性产品 取样品1O克(或10毫升)加无菌聚山梨酸酯8O或其它适宜的表面活性剂(不超过样品质量一半)混合均匀，该表面活性剂起匀化检品的作用。如需要，可加热但不允许超过40C。特殊情况下在特殊情况下不超过45℃ 。小心混合，需要时，在水浴或培养箱内保持这个温度。加入预热的pH=7．0的氯化钠一蛋白胨缓冲液使其成为1：1O供试品液。保温振摇以便形成乳状液，时间不超过3O分钟。如需要做进一步的十倍稀释，可用pH=7．0的氯化钠一蛋白胨缓冲液(含一定比例无菌聚山梨酸酯8O或适宜的表面活性剂 贴剂 取已用无菌镊子除去“释放衬垫”的本品十贴，具有粘性的一面朝上置无菌玻璃或塑料盘内，用 无菌的医用纱布(或起滤过作用的单纤维聚合体的栅格)覆盖在粘性面上。如需要，转移1O贴贴剂到最 小500ml体积的pH=7．0的氯化钠一蛋白胨缓冲液，缓冲液中含适当的灭活剂或钝化剂，如，无菌聚 山梨酸酯8O和／或卵磷脂。剧烈振摇该制剂至少3O分钟(制剂A)。同法制备另外1O贴，放置在至少 500ml肉汤培养基D中，剧烈振摇该制剂至少3O分钟(制剂B)。 供试品的检查 薄膜过滤 使用孔径不大于0．45um，具截留细菌效力的滤膜。该滤膜的材料选择能使细菌有效截留而不影 响供试品的检验。例如，硝酸纤维素滤器用于水溶液，油状和乙醇的稀溶液，醋酸纤维素滤器用于乙醇的浓溶液。过滤器具应设