白芨组织培养实施方案.pdf

白及组织培养实施方案 一、白及简介 白及为兰科白及属多年生草本植物，又名甘根、连及草、地螺丝、羊角七、 皲口药、利知子、刀口药、鱼眼兰等。分布在中国、日本以及缅甸北部，主产于 贵州、四川、湖南、湖北、安徽、河南、浙江、陕西等地。其味苦、甘、涩 , 性 凉 , 归肺、胃、肝经。以块茎供药用，能收敛止血，消肿生肌；治肺结核咳血， 支气管扩张咯血、胃溃疡吐血、尿血、便血等症。外用治外伤出血、烧烫伤、手 足皲裂等症。块茎含黏液质和淀粉等，可作糊料，在生物医药、保健食品、纺织 印染、特种涂料和日用化工等方面有巨大的商业利用价值。 又因白及为地生兰的 一种，花开艳丽，被作为庭院、居室及园林景观绿化苗木大量应用。 白及一般生于海拔 110—— 3200m的山野、山谷较潮湿处或林下半遮阴地带， 喜温暖、稍阴湿的环境，耐阴性强，忌强光直射，需排水良好、富含腐殖质的砂 质土壤，稍耐寒，冬季可在地下越冬。白及能产生大量的种子 ( 每个蒴果 10～30 万粒 ) ，但这些种子没有胚乳，自然萌发率极低，繁殖困难，但白及胚的薄壁细 胞贮存大量的蛋白质、 油脂和碳水化合物， 可作为种子萌发的营养成分， 因此白 及种子在保湿的情况下可以萌发， 是兰科植物中种子易萌发的类型。 传统的白及 繁殖方法大多以分株为主， 即将块茎分成小块种植， 但繁殖系数低， 大面积发展 对种源消耗大，不宜推广且难以满足市场需求。 采用白及组织培养可在短时间内大量获取种苗， 且成本相对较低， 是提高白 及产量的强有力措施。 目前，国内研究资料报道的白及组织培养方法各异， 所采 用的外植体各不相同， 且培养基及其中所加的植物生长调节剂种类和规格也千差 万别。 二、白及组织培养技术路线 参照植物组织组织培养获得再生植株的方式， 可通过 4 种途径获得白及再生 植株：一是由愈伤组织形成不定芽再生植株； 二是愈伤组织产生胚状体而再生植 株；三是由侧芽或顶芽再生植株；四是由茎尖产生原球茎而再生植株。 4 种方式 各有利弊， 传统认为采用侧芽或顶芽发育途径获得的后代性状较稳定， 但因为白 及原球茎带有大量共生菌，组培过程中容易出现污染。 结合卢氏当地实际， 探索采用白及无菌播种的技术路线， 通过不同浓度和培 方的培养基实现白及组织培养的最佳技术路线， 建立白及快繁体系。 白及组织培 养完整的技术路线如下： 经过试验优化后的技术路线为： 白及→种子 （采集优质种源蒴果） →表面消 毒→无菌播种（ MS培养基等）→原球茎（分化诱导）→白及小苗（分株、扩繁） →壮苗生根（炼苗）→完整小植株→炼苗 20-25 天→移栽→白及 三、实验准备： 种子： 白及的蒴果中有大量的种子，并且蒴果的消毒较方便，污染率低。 另一方面用种子作为外植体操作较容易， 并且组培过程中萌发率高， 培养的幼苗 生长较为迅速， 因此，种子作为外植体应用比较广泛， 大部分的组培研究都选用 种子。本实验选取卢氏本地优质白及（ Bletilla striata (Thunb．)Reichb．f ．）蒴 果，采收时间为 8 月下旬至 9 月中旬，此时间段胚龄大约为第 8 周至第 22 周。 器材： 高压灭菌锅、超净工