养殖池塘小型底栖动物简易分离方法幻灯片.ppt

养殖池塘小型底栖动物分离方法研究 研究对象 生活史的全部或大部分时间生活于水体底部的水生动物 能通过500μm孔径筛网但不能通过42μm孔径筛网的动物为小型底栖动物（meiofauna） 自由生活的线虫 (Nematoda) 桡足类 (Copepoda, 主要 为猛水蚤Harpacticoida) 寡毛类(Oligochaeta) 多毛类(Polychaeta) 缓步动物 (Tardigrada) 介形类 (Ostracoda) 涡虫 (Turbellaria) 腹毛虫 (Gastrotricha) 颚咽动物 (Gnotostomulida) 有甲动物(Loricefera) 须虾类 (Mystacocarida) 螨类 (Halacarida) 动吻虫 (Kinorhyncha) 主要类群(FENCHEL 1978; COULL, 1988) 研究意义 沉积物中有机碎屑的开发者和底栖微藻及细菌的主要消耗者 与细菌, 原生动物等微型生物组成底栖小/微食物网 是许多经济鱼、虾和贝类幼体的优质饵料, 保持水质稳定，提高物质转化效率，促进能量传递 物种多样性高, 个体数量,分布广泛, 个体微小、繁殖率高,生命周期短, 对微尺度环境改变反应快速, 是环境污染监测的重要生物指标 早期研究阶段 (1900-1950) 研究简史 系统分类的加速发展和群落定性描述（20世纪50年代初-60年代中期） 生态生理实验和生态系统动力学研究的起端（60年代后期—70年代） 实验生物海洋学研究（80年代以来） 国内研究动态 起步晚 20 世纪 70-80 年代 郭玉清，张志南，慕芳红等人 以陆架海域为主，启动于渤海，在黄海、东海、南海陆续展开 以分类学和多样性调查为主 养殖池塘小型底栖动物研究 于子山, 张志南. 虾池小型底栖动物的数量研究,1994 翟雪梅, 张志南. 虾池生态系能流结构分析, 1998 郭玉清, 叶兆弘. 虾池小型底栖动物类群组成和数量分布,2008 小型底栖动物分离方法 硅胶液密度梯度离心技术 所有进行分离小型底栖生物的技术, 都依赖于沉积物和小型底栖动物间密度的差异 底栖样品比重2.5~2.8，小型底栖动物比重1.15，硅胶溶液1.2~1.3 高速离心机 Ludox HS 40 550元/L 由聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 覆膜的铝酸盐溶胶 (Percoll) 硅胶液密度梯度离心技术 所有进行分离小型底栖生物的技术, 都依赖于沉积物和小型底栖动物间密度的差异 底栖样品比重2.5~2.8，小型底栖动物比重1.15，硅胶溶液1.2~1.3 高速离心机 Ludox HS 40 550元/L 由聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) 覆膜的铝酸盐溶胶 (Percoll) 目标和措施 预实验 调查虾塘中小型底栖动物的类群和丰度 确认使用福尔马林固定的必要性 确定蔗糖溶液和NaCl溶液的浓度 简易分离法研究 以克氏原螯虾养殖池塘里常见的水蚯蚓和线虫为小型底栖动物的代表，比较纯水、饱和蔗糖溶液、饱和NaCl溶液和硅胶溶液对小型底栖动物的分离比率 分别取50条水蚯蚓和100条线虫经5%福尔马林固定，虎红染色剂染色后混入10ml未经染色的底泥土中，制成一份待测样品 向待测样品中加入200ml分离液，并快速搅拌20s，静止5s待粗沙粒沉淀，倒出上层清液，在体式显微镜下记录清液中染色的水蚯蚓和线虫的数量，计算分离比率 分离液分为水、饱和蔗糖溶液和饱和食盐溶液三组，每组设置5个重复 对照组使用硅胶溶液Ludox HS40作为分离液，使用密度梯度离心法 数据分析 LSD (LEAST-SIGNIFICANT DIFFERENCE) 最小显著差数法 DUNCAN (DUNCANS MULTIPLE RANGE TEST) 新复极差法（SSR） 实验结果 实验结果 饱和NaCl溶液 饱和蔗糖溶液 纯净水 Ludox HS 40 水蚯蚓 61.2% 82% 3.2% 94.4% 线虫 84% 47% 6.6% 93.8% 水蚯蚓分离率：Ludox HS 40 饱和蔗糖溶液 饱和盐溶液 纯净水 线虫分离率： Ludox HS 40 饱和盐溶液 饱和蔗糖溶液 纯净水 分差分析表明四种不同分离液的分离率均有显著差异 讨论 器材简单，分离液易获得，操作简单，时间短 使用饱和蔗糖溶液分离水蚯蚓，使用饱和NaCl溶液分离线虫，分离率可以达到80%以上 此方法可用于日常养殖生产中对池塘底栖环境的监控 自由生活线虫与底栖桡足类数量之比(N／C比值) 思考 克氏原螯虾和中华绒螯蟹与小型底栖动物的捕食关系 小型底栖动物对养殖池塘水体环境变化的响应 小型底栖动物在改良池塘水体微环境方面的作用 N/C比值在池塘养殖污染检测方