共轭不饱和脂肪酸生物半合成法的初步分析.docx

硕士学位论文 硕士学位论文 摘要 摘要 共轭不饱和脂肪酸是一类含有两个以上共轭双键的脂肪酸，具有 抗癌、抗动脉粥样硬化、减脂、增强免疫、促进骨骼形成、抗糖尿病 等丰富的药理活性。其中，尤其以共轭亚油酸广受关注。此外，产油 微生物能产生并贮存质量超过其细胞干重20％的微生物油脂，其脂肪 酸组成与植物油脂相似，业已成为工业微生物领域的研究热点之一。 本文对共轭亚油酸的生物半合成法开展了初步的研究。 42株云南红豆杉内生真菌用于筛选产油菌株。首先，采用苏丹Ⅳ 染色法，光学显微镜观察至lJl8株含油菌株菌丝内的被染成棕红色的油 脂滴。以Folch法提取测定初步筛选得到的菌株油脂产率。油脂产率 达到15％以上的丝状真菌有6株，其中菌株E1．3的油脂产率最高，达 到25．2％。 为了增jJI]E1．3油脂产量，考察了碳源、氮源、碳氮比、温度、培 养周期等因素的影响。优化后的发酵培养基如下：60 g葡萄糖，2 g 酵母浸粉，2 g硝酸钾，2 g磷酸二氢钾，0．2 g氯化钠，O．4 g硫酸镁， 10 mL微量元素溶液及1 L水。优化后的培养条件为：100 mL液体培 养基在250 mL摇瓶中，180 r／min，28℃培养6 d。在此条件下，生物 量为10．4 g干菌丝／L，油脂含量为32．2％。 此外，恰当的油脂提取步骤对生产真菌油脂也有重要的影响。为 了确定合适的真菌油脂提取工艺，选择了6种破碎菌丝的方法和5种经 典的油脂提取方法进行试验。结果表明：机械匀浆破碎菌丝的效果最 佳，而Folch法优于其它油脂提取方法。 气质联用分析了E1．3菌油脂肪酸构成，其中亚油酸含量最高，达 到3 1．6％。曲霉E1．3菌油作为原料，乙二醇单丁醚作为溶剂，氢氧化 钾作催化剂，碱催化异构化法制备共轭亚油酸。紫外光谱监控反应进 程，考查多种因素对亚油酸转化率的影响，优化的反应条件：温度140 ℃，反应周期3 h，强碱催化剂与原料质量比为0．3：1，原料与溶剂质量 比为1：5。在此条件下，共轭亚油酸的收率达到86％。结果表明：菌 油可替代植物油作为碱催化异构化法制备共轭亚油酸的原料。 关键词：内生真菌；菌油；共轭亚油酸；碱异构化 硕士学位论文 硕士学位论文 ABSTRACT ABSTRACT Conjugated unsaturated fatty acids containing two or more conjugated double bonds have been found numerous biological actions， including：anticarcinogenic effect，antiatherogenic effect，stimulating the immune response，reducing bedy fat，enhancing bone formation，and anti—diabetic effect．Particularly Conjugated linoleic acid(CLA)has attracted wide interest．Meanwhile，Oleaginous microorganisms have been one of the hot iSSUOS in the field of industrial industrial microbiology owing to the ability of accumulating microbial oil、Ⅳi廿1 similar fatty acid composition to that of plant-based oil over 20％of their biomass．The semi—biological synthesis method of CLA Was studied initially in this dissertation． 42 endophytic fungi of Taxus yunnanensis were selected to screening for oleaginous strains．according to the Sudan IV stai