骨髓间充质干细胞移植治疗血管性痴呆大鼠的实验分析.docx

天津医科大学硕士学位论文中文摘要 天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的： 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对血管性痴呆大鼠神经功能恢复的 影响，并探讨其机制。比较立体定向移植与尾静脉移植两种方法的疗效，为血管 性痴呆的临床治疗提供有价值的实验依据和方法。 方法： 1、利用大鼠骨髓，通过密度梯度离心结合贴壁筛选的方法分离、培养BMSCs． 并用BrdU标记。 2、将Wistar大鼠随机分为以下五组：03正常对照组②假移植组③痴呆模型组④ 立体定位移植组⑤尾静脉移植组。假移植组、痴呆模型组、立体定位移植组和 尾静脉移植组均采用永久结扎双侧颈总动脉制作大鼠血管性痴呆模型。立体定 位移植组和尾静脉移植组造模后第7天分别将BMSCs细胞悬液约tOpL(约1 x106 个细胞／肛L)通过立体定向移植到大鼠海马部位和通过尾静脉注射移植，假移植组 将等量生理盐水通过立体定向移植到大鼠海马部位，正常对照组大鼠不做处理。 3、造模前后和BMSCs移植后均进行Moms水迷宫行为学测试，包括定位航 行试验和空间探索试验。BMSCs移植后30天后各组大鼠断头取脑，制备石蜡切 片，行苏木素。伊红(HE)染色观察病理变化。③以NSE、GFAP、DXC及Nestin 作为增殖、分化的标记物。免疫组化染色方法检测DXC及Nestin阳性细胞、 Brdu+NSE与Brdu+GFAP的双阳性细胞。探讨不同途径移植的MSCs在脑缺血 大鼠的脑内的存活、迁移及分化情况，并探讨其机制。 结果： (1)通过密度梯度离心法结合贴壁筛选法分离大鼠骨髓间充质干细胞，在体外 进行传代、扩增。经流式细胞仪检测分离所得细胞表达粘附分子CD90(BMSCs 的标志之--)FFJ性率99％，CD3 1(内皮细胞标志)阳性率3．4％，CD34(骨髓造血干 细胞标志)阳性率0．3％，证实所分离的细胞大部分为骨髓间充质干细胞。(2)采用 永久结扎双侧颈总动脉制作血管性痴呆大鼠模型后，通过Moms水迷宫行为学 测试，造模后7天、造模后30天与造模前相比，逃避潜伏期延长，存在统计学 差异(P0．05)，证实造模成功。(3)BMSCs移植后30天，模型组、立体定向移 植组和尾静脉移植组进行行为学测试，三者之间相比，立体定向移植组和尾静 脉移植组较模型组逃避潜伏期缩短(PO．05)，并且立体定向移植组优于尾静脉移 天津医科大学硕士学位论文植组之间有统计学差异(PO．05)。(4)BMSCs移植组在移植部位可观察到Nestin 天津医科大学硕士学位论文 植组之间有统计学差异(PO．05)。(4)BMSCs移植组在移植部位可观察到Nestin 单染阳性细胞，Brdu十NSE、Brdu+GEAP双染阳性细胞。证实移植的BMSCs 已在宿主脑内成活，并且已分化为神经元和神经胶质细胞。 结论： (I)BMSCs可以在体外分离、培养，传代后可获得纯度较高的骨髓间充质干 细胞。(2)采用永久结扎双侧颈总动脉制作大鼠血管性痴呆模型简单易行．结果可 靠，可以用于血管性痴呆的研究。(3)经立体定向移植和尾静脉移植后，BMSCs 可在脑内存活并分化成神经元样及神经胶质样细胞，改善受损的神经功能。(4) 立体定向移植治疗效果较尾静脉移植治疗效果更好。 关键词：骨髓问充质干细胞血管性痴呆模型立体定向尾静脉移植 Il 天津医科大学硕十学位论文Abstract 天津医科大学硕十学位论文 Abstract oBJECTIVE： To observe the recovery of neurological function and investigate the protective mechanism，After mesenchymal stern eells(BMSCs)of vascular rats were transplanted by stereotaxis and vcna caudalis path．This will provide therapy foundation in clinical MCSs application on vascular dementia and help to discover more effective therapy of vascular dementia． METHODS： 1．Bone marrow tissues of rats were collected and theBMSCs Were separated with density gradient centrifugation and screening the cells adherent to the Plastic surface． ne BMSCs were cultivated in sp