创伤弧菌FJ03-X2荚膜多糖的提取和免疫原性分析.docx

独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位c毕业)论文作者亲笔签名：引知年嗍弘口萝、‘、J3 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位(毕业)论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 必威体育官网网址，在 年后解密可适用本授权书。 不必威体育官网网址，本论文属于不必威体育官网网址。 学位(毕业)论文作 同期：≯呱6。够 指导教师亲笔签名： 同期：嬲参．多．／r 2 福建农林大学硕士毕业论文摘 福建农林大学硕士毕业论文 摘 要 创伤弧菌(Vibrio vulnificus)是严重危害水产动物的人兽致病菌。荚膜多糖 (Capsular polysacchadde，CPS)是创伤弧菌重要的毒力因子和抗原成分，在创 伤弧菌的致病过程中起重要作用，为了了解创伤弧菌CPS的免疫原性，本研究 以鳗源创伤弧菌强毒株FJ03一X2为研究对象，提取纯化了创伤弧菌CPS，并对其 成分、分子量，毒力和免疫原性进行了分析。 紫外吸收分光光度法测定CPS样品，其主要峰值在200nm，基本符合多糖 吸收峰的特征；SDS．PAGE的双氨银染图谱未见明显的蛋白质和脂多糖条带；琼 脂糖凝胶电泳结果显示CPS样品含少量核酸成分。结果表明提取得到较纯的 CPS。 通过SDS．PAGE和阿尔新蓝．双氨银染法分析CPS，结果表明，CPS的相对 分子量分布范围为3 1 120 KDa；CPS可分为高分子量成分和低分子量成分；高 分子量成分仅用阿尔新蓝染色即可在凝胶上清晰显示，呈现为连续的弥散状区 带，其含量较高，相对分子量范围为311~43 KDa；低分子量成分则需阿尔新蓝． 双氨银染法染色才能在凝胶上显示，其含量较低，相对分子量范围为43之0 KDa。 用CPS经腹腔注射免疫昆明鼠，通过菌体凝集反应、ELISA和Dot ELISA 等方法分析CPS对鼠的免疫原性，结果显示，鼠抗CPS血清可和一定浓度的创 伤弧菌菌株FJ03．X2菌液发生凝集反应，凝集效价为24-5；ELISA结果表明鼠抗 CPS血清的抗体效价可达1：12 800。初步说明，鳗源创伤弧菌菌株FJ03．X2的 CPS对小鼠具有免疫原性，能够诱导小鼠产生特异性体液免疫应答。 毒力试验表明，CPS对欧鳗无直接致病力。CPS经腹腔注射免疫接种欧鳗， Dot ELISA结果显示，CPS不能激发试验欧鳗产生体液免疫应答；免疫保护试验 表明，CPS不能诱导试验欧鳗产生保护性免疫应答。 关键词：创伤弧菌；荚膜多糖；阿尔新蓝；欧洲鳗鲡；免疫原性 福建农林大学硕士毕业论文Extraction 福建农林大学硕士毕业论文 Extraction and analysis of the lmmunigenicity of capsular polysaccharide(CPS)of Vibrio vulnificus FJ03一X2 Abstract Vibrio vulnificus is a zootoxic pathogen which does great damage to aquatic animals．Capsular polysaccharide(CPS)is one virulence factor and antigen of Vibrio vulnificus,which plays great importance in infecting host．To research the immunogenicity of the CPS of Vibrio vulnificus,the CPS of Hbrio vulnificus FJ03-X2 was extracted and purified．The components、molecular weight、virulence and immunogenicity of the CPS were analyzed． The ultraviolet absorption peak of CPS samples Was found at 200nm witll uv．vis absorption spectrophotometer．which coincides essentially、析tll t