大腹园蛛拖丝蛋白基因的克隆和序列研究.docx

多 多 重 P C R 、热 启 动 P C R 等 方 法 进 行 扩 增 ，并 根 据 实 验 结 果 最 终 确 定 了长 距 离 P c R 反 应 对 复 杂 基 因 的扩 增 。通 过 多种 引物 对 实验 、M gCI :浓 度 梯 度 实验 、引物 浓 度 梯 度 实 验 、退 火 温 度 梯 度 实 验 、延 伸 时 间梯 度 实 验 、tou ch do wn 循 环 等 实 验 对 P C R 以及 R T-P C R 反 应 条 件 进 行 优 化 ， 以扩 增 大 腹 园蛛 拖 丝 蛋 白基 因 。凝 胶 纯 化 、 回 收 扩 增 获 得 的 大 腹 园 蛛 拖 丝 蛋 白基 因 D N A ，克 隆 于 p D rive 载 体 ，筛 选 转 化 子 ，并 经 P C R 、酶 切 和 序 列 分 析 鉴 定 阳性 克 隆 。将 其 中 的 一 个 克 隆 基 因 片 段 构 建 入 p E T 犯 a(+) 蛋 白表 达 载 体 。 本 论 文 以 D N A 为 模 板 ，通 过 P C R 扩 增 获 得 了编 码 大 腹 园蛛 拖 丝 蛋 白基 因 的克 隆 Av D S I，序 列 长 2 199bp ，序 列 分 析 表 明不 含 基 因 内含 子 ; 通 过 R f-P C R ，获 得 了编 码 大 腹 园蛛 拖 丝 蛋 白基 因 的 克 隆 Av R S Z ，序 列 长 95 1bp ;序 列 比较 分 析 推 测 大 腹 园蛛 拖 丝 蛋 白基 因存 在 着 两 种 组 分 ，Av R sZ 克 隆 为 编 码 大 腹 园蛛 拖 丝 蛋 白基 因组 分 一1，Av D sl 克 隆 可 能 为 大 腹 园蛛 拖 丝 蛋 白基 因 的 另 一 组 分 一2 。 获 得 了 可 以表 达 大 腹 园 蛛 拖 丝 蛋 白基 因 Av R sZ 的 pE T-R sZ 表 达 载 体 。这 些 成 果有 助 于进 一 步研 究 大 腹 园蛛 拖 丝 蛋 白基 因 的基 因 组 成 和 结 构 特 征 、 为 应 用 蛋 白质 剪 接 技 术 开 发 蜘 蛛 拖 丝 蛋 白的研 究 提 供 了基 因 克 隆 ，构 建 的表 达 载 体 为 进 一 步 研 究 蜘 蛛 拖 丝 蛋 白基 因 的 表 达 、表 达 蛋 白 的 结 构 以及 应 用 表 达 蛋 白进 行 人 工 纺 丝 奠 定 了 基 础 。 关键 词 : 大 腹 园蛛 ，拖 丝 蛋 白基 因 ，克 隆 ，表 达 载 体 C lo C lo n in g a n d S eq u en ee A n a ly sis o f A ra n eu s Ve n trieo su s D r a g lin e S ilk P re te in G e n e A B S T R A C T SP ider drag lin e silk w ith un iqu e eh aracteristies of h igh stren gth an d elastieity b e eo m es a g o o d n atu ral P ro tein fib e几 an d w a s n am ed b io stee l in sP id er ’5 sev en d lfl笼re n t fu n ctio n al silk s. SP ider drag lin e silk Protein 15 com Po sed o f rePeate d seque nees，h igh G C an d nu m e ro u s ite ratio n s o f fo u r d iffe re nt a m in o a e id m o tifs. It 15 d iffi e u lty to design Prim ers for P C R an d R 卫P C R ，an d also it 15 d iffi cu lty to obtain e o m P le t g e n e o f sP id e r dr ag lin e silk P ro te in b e e au se o f th e c o m P e titio n betw een tem P late s an d Pri m ers. Ai P resent，there are n o reP orts on the eom P lete sP id er drag lin e silk g en e an d the m o lecu l