实验七 微生物板直接计数法和测微技术.ppt

一.实验目的 二、基本原理 1．血球计数板计数原理 血球计数板是一块特制的载玻片，由四条槽构成三个平台，中间较宽的又被一短的横槽隔成两半，每边平台上刻有一个方格网，每个方格网共分九个大方格，中间的大方格即为计数室。 每个大方格由25个中方格或16个中方格组成。计数时通常统计5个（或4个）中方格的细菌数，再换算成1ml样品中的细菌数。 2．测微尺的使用原理 目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片，其中央有精确的等分刻度，分50和100两种，通过镜台测微尺校正后，可用于测量细菌的大小。 镜台测微尺是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般是将1mm分为100格，每格0.01mm（即10μm），用于校正目镜测微尺每格的相对长度。 三、实验材料 1．菌种 啤酒酵母、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌。 2．仪器或其它用具 血球计数板、显微镜、盖玻片、载玻片、目镜 测微尺、镜台测微尺、无菌毛细滴管等。 四、操作步骤 1. 啤酒酵母菌显微计数 ① 取清洁无油的血球计数板，在计数室上面加盖血盖片。（血球计数板不可刷洗也不可擦水）。 ② 取酵母菌液，摇匀。用滴管在盖玻片边缘滴一小滴，使菌液自行渗入，计数室内不得有气泡。 ③ 用10×镜观察并将计数室移至视野中央。 ④ 在10×或40×镜下计数5 个（或4个）中格的菌数。 ⑤ 然后求得5 个（或4个）中格的总菌数，再按公式计算求得每ml菌液中的含菌数。 注意事项：计上不计下，计左不计右。出芽计半。 ① 目镜测微尺的校正 校正并计算10×、40×、100×镜目镜测微尺每小格的实际长度。 ② 酵母菌体大小的测定 用于计数的啤酒酵母菌的制片（可用计数的血球计数板）置于载物台上，在40×镜下用目镜测微尺测量并计算菌体的长和宽。 ③ 金黄色葡萄球菌和枯草杆菌大小的测定 将金黄色葡萄球菌和枯草杆菌分别进行简单染色后，选取5个菌体在100×镜下分别测定单个细胞直径和长度、宽度，分别计算其平均大小。 五、预期结果 1. 目镜测微尺标定结果 10×镜下目镜测微尺每格长度是 10 μm。 40×镜下目镜测微尺每格长度是 2.5μm。 100×镜下目镜测微尺每格长度是 1 μm。 注意：保留小数点后二位。 2. 微生物大小测定结果 3. 显微计数结果 记录于下表中。A表示五个中方格中的总菌数。 下次实验内容 微生物的接种技术及分离纯化 问题与讨论 1、为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行效正？P48,(1)  2、某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1-2中可行的检测方法。P92,(2) 上次试验习题解答 1、你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？P46,（1） 四种霉菌的异同如下：曲霉，外生孢子（分生孢子），有足细胞，菌丝有隔；青霉：外生孢子（分生孢子），为扫帚状，菌丝有隔，相对较细；根霉：内生孢子（孢囊孢子），菌丝无隔，有匍匐枝和假根；毛霉：内生孢子（孢囊孢子），菌丝无隔。 * 1．明确显微镜计数的原理并学习使用血球计数板进行微生物计数的方法。 2．学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法，增强对微生物细胞大小的感性认识。 实验七 微生物直接计数法  和测微技术 每个大方格边长为1mm，盖上盖玻片后，盖玻片与载玻片之间的高度为0.1mm，所以计数室的容积为0.1mm3（1×10-4ml）。 1ml样品中的总菌数=［A/5(4)］×25(16)×104×B A：5个（或4个）中方格中的总菌数 B：菌液稀释倍数（本实验为100倍） 测微尺包括目镜测微尺和镜台测微尺。 目镜测微尺每格长度(μm)=（镜台测微尺格数×10 μm ）/目镜测微尺格数，如：(10×10 μm /60) 2. 微生物大小的测定 长/μm 宽/μm 长 宽 长轴/μm 短轴/μm 长轴 短轴 2~4 1-.1.5 0.8-1 7~10 4~6 均值 5 4 3 2 1 实际大小 目镜尺格数 实际直径/μm 目镜尺格数 实际大小 目镜尺格数 枯草杆菌 金黄色葡萄球菌 酵母菌 序 号 第二室 第一室 每毫升酵母菌液的总菌数（个/mL) 二室平均值? 5个中格的菌数A 计数室 每毫升酵母菌液中的总菌数（个） =(?/5)×25×104×100