痰液诱导和处理方法.ppt

诱导痰的处理及分析 痰处理是否延迟 选择性痰还是全部痰 痰液化使用的DTT会降低某些介质量 离心及贮存管子影响, 推荐离心为400×g，使用聚丙烯材料的管子 诱导痰在科研、临床应用 诱导痰在临床试验应用中需注意： 诱导痰的细胞计数，特别是嗜酸性细胞和可溶性的介质可代表气道炎症状况 *不能代表气道粘膜部位（活检）的炎症状况 当观测某一化合物对嗜酸性细胞影响时，可用诱导痰的方法 *不宜用于观察哮喘疾病的本质 当基于肺功能随机分组时，在基线时嗜酸性细胞数在组间的差异较大 痰嗜酸性细胞数在同一个体不同时间测定具有重复性，但个体间变异较大，即使在有相同的临床特征的个体中 诱导痰在科研、临床应用 临床应用： 哮喘-痰嗜酸性细胞计数 协助哮喘诊断 部分哮喘患者在吸入激素治疗仍有症状，可能存在嗜酸性细胞持续存在，提示有必要加用抗炎治疗 职业性哮喘，接触工作环境后，嗜酸性细胞升高 咳嗽-痰嗜酸性细胞计数 协助诊断嗜酸细胞性支气管炎（EB）（＞3%） * 诱导痰在科研、临床应用 COPD 痰中性粒细胞绝对值及分类与FEV1呈负相关 部分患者嗜酸性细胞计数＞3% 其他肺疾病，如间质病、结节病、外源性或敏性肺泡炎等，知之甚少 * 实际应用的体会 健康组+ 哮喘组 嗜酸性细胞阳性率%* 0 66.7 ECP浓度（ng/ml）# 138.6±68.9 1065.2±1124.1 健康组与哮喘组痰嗜酸性细胞阳性率和ECP比较 * 痰中发现嗜酸性细胞为阳性 # 检测方法：化学发光免疫监测系统 + p＜0.01 实际应用的体会 * 正常组 哮喘组 COPD组 IL-4 (ng/ml) 9.87±7.31 17.97±13.05 16.15±18.82 IL-5 (ng/ml) 11.06±15.10 46.98±29.89 100.11±158.36 MPO (ug/ml) 2.98±4.64 2.93±3.95 150.00±152.07 正常组、哮喘组和COPD组3种细胞因子比较 均采用ELISA方法测定 应用前景 临床应用于哮喘和COPD 应用于其它肺疾病，如肺癌、感染、肺间质病等 诱导痰和呼吸生理 从体外细胞培养到功能基因组学 从体外细胞培养到蛋白质组学 * 致谢： 指导老师：张洪熹主任 团队成员： 张锋英 施永美 李维欣 实验室： 周春平 曾日亮 * * 谢谢 * 痰液诱导和处理方法 杭晶卿 上海普陀区人民医院 内容 * 诱导痰的目的 用高渗盐水和非侵入性的方法收集气道分泌物用于研究气道炎症特征。 与支气管活检及灌洗相比其优点： 安全性高 对操作者要求较低 非侵入性，病人易接受 可多次重复检测 可在大的临床试验中运用 * 诱导痰的发展历史 1992，Pin et al 从哮喘至COPD 1996年，瑞典斯德歌尔摩 workshop 方法标准化和样本分析 1997年，ERS，德国柏林the second formal workshop 涉及诱导痰的各个方面 * 1998年，瑞士日内瓦 重点在4个方面：痰液诱导及处理、炎性标志物、在临床试验中、在临床实践中 1999年在ERS支持下成立了8个工作小组（Task Force） 2000年，意大利佛罗伦萨 最后达成共识并成文，有关疾病为哮喘和COPD * 诱导痰的发展历史 诱导痰的方法 设备：雾化装置-推荐使用超声雾化，其诱导成功率最高，要求输出量在~1ml/min 盐水浓度：0.9%-7%，推荐3%-5% 不同的盐水浓度： 影响诱导的安全性和患者的耐受性 对痰的组成，细胞总数及分类无影响 对痰的上清液中ECP及组胺无影响 * 诱导痰的方法 诱导前准备： 无菌盐水新鲜制备 基础FEV1检测 氧饱和度检测（如存在低氧血症） 准备好急救药物及设备（类似激发试验所需药物） 短效支气管扩张剂使用：沙丁胺醇2-4喷 对ECP无影响，可能降低组胺浓度 * 诱导痰的方法 诱导时间：推荐累积时间15-20分钟 诱导的最初时段，中性、嗜酸性细胞和粘液浓度较高 诱导的后期时段，淋巴、巨噬细胞和表面活性物质浓度较高 关键：在同一时间不同个体及不同时间同一个体的诱导时间必须保持一致 * 诱导痰的方法 诱导痰中的间歇时间 每5min 诱导痰的间隔时间 2次诱导痰的间隔时间不小于48小时 重复诱导痰间隔在8-24小时内，第二次痰中的中性粒细胞增加 * 诱导痰的方法 吐痰 唾液吐掉，将痰吐在另一器皿中 自发痰和诱导痰的差异 相对于后者，细胞活力较低、炎性细胞的品质较差 * 诱导痰的方法 Protocol 向病人作好解释 检查仪器，设置好雾化的输出量 检查FEV1 吸入沙丁胺醇200微克 10分钟，测支扩后FEV1 吸入固定浓度盐水（3 or 4.5%）或逐渐递增的盐水浓度（3，4，5%） 诱导