PCT胶体金试纸制备和其原理.ppt

PCT胶体金试纸制备和其原理;Date;胶体金（colloidal gold）也称金溶胶（gold solution）： 是由金盐被还原成原金后形成的金颗粒悬液。胶体金颗粒由一个基础金核（原子金Au）及包围在外的双离子层构成，紧连在金核表面的是内层负离子（AuC12－），外层双层正离子层H+则分散在胶体间溶液中，以维持胶体金游离于溶胶间的悬液状态。;;2、呈色性 微小颗粒胶体呈红色，但不同大小的胶体呈色有一定的差别。最小的胶体金（2～5nm）是橙黄色的，中等大小的胶体金（10～20nm）是酒红色的，较大颗粒的胶体金（30～80nm）则是紫红色的;3、光吸收性 胶体金在可见光范围内有一单一光吸收峰，这个光吸收峰的波长（λmax）在510～550nm范围内，随胶体金颗粒大小而变化，大颗粒胶体金的λmax偏向长波长，反之，小颗粒胶体金的λmax则偏于短波长。 胶体金的这一特性被用来检测所配制的胶体金溶液是否符合生产所需。实验生产需要的合格的胶体金溶液的最大吸收波长应在522~528nm处，且检测最大吸光度处吸光值与456nm处吸光度值的比值，应在1.6-1.8之间。 ;;2、免疫胶体金原理 免疫金标记技术(Immunogold labelling techique) 主要利用了金颗粒具有高电子密度的特性，在金标蛋白结合处，在显微镜下可见黑褐色颗粒，当这些标记物在相应的配体处大量聚集时，肉眼可见红色或粉红色斑点，因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中，这一反应也可以通过银颗粒的沉积被放大，称之为免疫金银染色。 胶体金标记，实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。吸附机理可能是胶体金颗粒表面负电荷，与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而形成牢固结合。用还原法可以方便地从氯金酸制备各种不同粒径、也就是不同颜色的胶体金颗粒。这种球形的粒子对蛋白质有很强的吸附功能，可以与葡萄球菌Ａ蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白多肽缀合物等非共价结合，因而在基础研究和临床实验中成为非常有用的工具。 ;3、常用的免疫胶体金检测技术 （1）免疫胶体金光镜染色法 （2）斑点免疫金渗滤法 （3）胶体金免疫层析法 将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂（抗体或单克隆抗体）吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，再移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。 ;;2、PCT的指征 PCT是诊断和监测细菌炎性疾病感染的一个参数。 PCT的测定可以预示为：作为一个急性的参数来鉴别诊断细菌性和非细菌性感染和炎症。 监测有感染危险的患者（如外科术后和器官移植后免疫抑制期，多处创伤后）以及需要重症监护患者，用来探测细菌感染的全身影响或检测脓毒性并发症。 ;在细菌感染/脓毒血症状态下，PCT在各个组织、器官大量形成并释放进入血液循环系统 ;脓毒症诊断的生物标志物;3、PCT在临床中的意义;;试剂和浓度;合格的原料和生产前的准备;2、配液前的准备工作以及注意事项;（3）由于氯金酸的对光敏感性，因此配制胶体金的整个过程都需要避光，或者弱光，避免使用日光灯等照明设施。氯金酸长时间储存在光下容易变成黑色，影响结果的观察。 （4）氯金酸吸湿性极强，因此综合考虑，为了减少称量误差等因素，称量时，天平室将抽湿机打开，使空气湿度降至30％左右，同时采取减量法称量。一般情况下，拆开后尽量一次配置完。 （5）配制好的1％的氯金酸溶液储存在4℃冰箱里，黑色塑料袋封住避光。 ;3、PCT胶体金试纸样品垫处理液配置;4、PCT胶体金试纸金标垫处理液配置;5、PCT胶体金试纸样品垫和金标垫处理;6、配置胶体金;5、检测1：待胶体金溶液冷却至室温，肉眼观察胶体金溶液的颜色是不是酒红色，是否澄清，无漂浮物或者沉淀。 检测2：用分光光度计检测吸光度：检测最大吸光度值是否在525nm附近，方法是可以用光谱扫描法找到最大吸光度值波长，也可以用多波长测量法检测525nm及其附近波长的吸光度，比较大小。 最大吸光度值在525nm+3nm处为合格. 检测3：检测最大吸光度处吸光值与456nm处吸光度值的比值，是否在1.6-1.8之间。;影响胶体金稳定的因素： 1、操作环境和所用容器的清洁度 2、配制溶液所用的水（均需使用双蒸水或三蒸去离子水配制，烧制胶体金最好用去离子水） 3、还原剂的使用量 4、不同的烧制方法 5、胶体金的制备量 6、