胶体金快速免疫诊疗技术.ppt

胶体金快速免疫诊疗技术 层析法技术优势:简单\现场\快速 1.打开包装取出试纸条 2.直接插入待测样品中 3. 目测读出结果（3-10分钟内） 与常规诊断方法相比 优点 缺点 快速：全部检测过程仅需 3-10分钟。 简便：不需其它任何仪器设备，操作也极其简单，无需专业人员，携带方便，可随时随地进行。 廉价：单个测试条成本极低 可单份检测：对标本既能成批检测，又可单份检测，可立刻拿到结果，不必等待。 稳定性好：金标试剂稳定，可长期保存。 检测标本种类多：既可用于查血，又可用于检尿或唾液，因而适合各种检查 定量问题 灵敏度问题 技术应用 类别 应用领域 检测的物质 人类医学 各级医院,血站,CDC,防疫站,诊断中心；家庭自检；商检系统；边检口岸；公安系统. 传染病（乙肝五项,HIV, SARS等） 标志物（AFP、肌钙蛋白、粪便血红蛋白等） 女性妊娠（hCG(早孕),LH,FSH) 毒品（吗啡,K粉,摇头丸,冰毒） 农牧业 畜牧兽医站, 商检系统,边检口岸,农牧类院系和研究所 传染病（禽流感,兽瘟疫等） 环境 环保监测部门,研究机构 有害物质超标 食品安全 食品安全检测中心,各监管部门 农兽药残留（磺胺类、瘦肉精等）,大肠杆菌,黄曲霉素 试纸条组成结构 测试线 （T线） 控制线（C线） 胶体金垫 吸水滤纸 样品垫 NC膜（硝酸纤维素膜） 层析方向 PVC底板 有4个组分：⑴、吸水纸（样品垫）。⑵、玻璃纤维膜（胶体金垫）。膜上吸附着干燥的金标抗体（流动带）。⑶、硝酸纤维素膜，膜上包被着抗原或抗体条带和能与标记物直接起反应的质控物条带（检测带）。⑷、吸水纸。以上各组份首尾互相衔接。 基本原理是将已知的特异性抗原或抗体固定于硝酸纤维素膜上某一区带作为检测带，在样品区滴加样品后，借助毛细作用，样品泳动至玻璃纤维膜，金标复合物溶解，并与样品进行抗原抗体反应，形成复合物，继续泳动至硝酸纤维素膜的检测区，带有金标记的复合物被检测区抗原或抗体捕获，呈现红色条带。如样品中没有待测抗原或抗体，则不发生结合，即不显色。在硝酸纤维素膜检测区附近一般再固定上针对金标结合物相应的抗原或抗体作为质控带，无论样品中有无待测物，质控线都应显示，如无，则检测失败。整个过程一般在15分钟内完成，操作简单、快速，且不需任何仪器。 免疫层析法检测原理分类介绍 胶体金免疫层析法检测流脑抗体（间接法） 胶体金标记的兔抗人IgG，样品中的流脑抗体与胶体金标记的抗人IgG结合，沿硝酸纤维素膜移动，在包被有流脑抗原结合，出现红色反应线。 免疫层析法检测原理分类介绍（双抗体夹心） （以HCG检测为例） HCG-β亚基抗体Y2，羊抗鼠二抗固定于硝酸纤维素膜上，金标HCG-α亚基单抗Y1固定于玻璃纤维素膜上。 免疫层析法检测原理分类介绍（竞争反应） （以吗啡检测为例） 吗啡偶联物和胶体金标记的抗吗啡单克隆抗体固定于膜上测试区。通过吗啡偶联物和尿液中的吗啡竞争结合金标单克隆抗体，最小检出量300ng/ml。结果判定：阳性（+）：吗啡300ng/ml以上，质控区出现一条紫红色条带，测试区内不出现紫红色条带。吗啡浓度高于300ng/ml时，胶体金抗体与吗啡全部结合，从而不与吗啡偶联物结合而不出现紫红色条带。阴性（-）：吗啡在300ng/ml以下。出现两条紫红色条带，一条在测试区内，另一条在质控区内。吗啡浓度低于300ng/ml时，胶体金抗体不能与吗啡全部结合。这样，胶体金抗体在层析过程中会被固定在膜上的吗啡偶联物结合，测试区内会出现一条紫红色条带。无效：质控区未出现紫红色条带，表明不正确的操作过程或试剂盒已变质损坏。 抗体 Antibody 来源差异: 鼠抗,兔抗和羊抗 种类差异: 单抗,多抗 浓度: 浓缩 溶解液:不含盐 抗原抗体生物原料 抗原 Antigen 全病毒抗原 重组抗原 胶体金是由氯金酸（HAuCl4）在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。 容器硅化处理：玻璃表面少量的污染会干扰胶体金 颗粒的生成，一切玻璃容器应绝对清洁，用前经过酸洗、硅化。将玻璃容器浸泡于５％二氯二甲硅烷的氯仿溶液中１分钟，室温干燥后蒸馏水冲洗，再干燥备用 。 胶体金的制备 胶体金的制备 枸橼酸三钠还原法 15nm、18