体内药物分析总结.doc

PAGE 20 - 体内药物分析总结 专题一：生物样品处理原则与技术 一、一般问题 1. 药物的体内过程（ADME） 吸收：药物由给药部位未经过化学结构变化进入血液循环系统的过程。 首过效应：药物经肠道吸收首次进入肝脏时，有些药物可被肠液或肠道上的肠菌酶破坏，或在肝内受到微粒体混合功能氧化酶代谢，使进入体循环的药量减少。 分布：药物吸收后，由血液透过各种生理屏障向机体各部位可逆运转的过程。影响分布因素： 1）? 药物化学结构与理化性质2)血流量与膜通透性3）药物与血浆、组织蛋白结合率 注意竞争血浆蛋白结合的药物间相互作用及其临床意义：显著增强其药理效应或毒性。 转化（代谢）：药物经吸收分布后，在药酶作用下经历化学变化的过程。 排泄：药物及代谢物从体内被清除的过程。主要是肾排泄和胆汁排泄 肠肝循环：药物经胃肠吸收，经胆汁分泌进入小肠或药物经吸收后在肝转化为代谢物，经胆汁分泌排入小肠，在小肠处重吸收的过程。特征为“双吸收峰”。 药物体内状态及待测物选择 a.一般测定血清或血浆中结合型和游离型药物总浓度，几个别用全血（环孢霉素A） b.游离型：理论上说游离药物与药理作用强度直接相关。主要方法有2种： 1平衡透析法：将含药物的血浆与透析液放置于半透膜两侧，在一定温度下搅拌使其平衡。半透膜能阻挡血浆蛋白和结合药物的血浆蛋白，而游离药物自由通过半透膜并达平衡。优点：平衡状态下，结果真实可靠 缺点：受稀释作用影响，费时 2超滤法：利用离心力迫使药物通过半透膜，同时血浆中水分也不断被滤除，使样品管内血浆样品不断浓缩，打破了药物与血浆蛋白结合的动态平衡。优点：设备简单，时间短，收集到足够的超滤液可直接进样 缺点：非平衡状态下测定。 生物样品种类、特点与选取和取样方式 种类：血液、尿液、唾液、头发、脏器组织、乳汁、胆汁、粪便等 特点：干扰杂质多、样品量少、待测物浓度低。方法灵敏度及专属性要求高 a.血液：损伤性取样，较麻烦，较好体现药物浓度和疗效的关系。主要用于药动学、生物利用度、临床治疗药物监测中，大都测定原型药物总量。b.尿液：无损伤取样，方便，药物浓度较高，收集量可很大。但易受食物、饮水多少影响。主要用于药物剂量回收、药物尿清除率、生物利用度的研究。 c.唾液：无损伤取样，易收集，可用于药动学，药物滥用，可体内微量元素检测。d.组织：常采用肝、胃、肾、肺、脑、肌肉等脏器组织。首先需将检材均匀化，制成水基质溶液，然后再用适当方法萃取药物。e.头发：取样方便，无伤害，可用于体内微量元素含量测定，药物史估计、滥用药物监测以及毒性药物的检测。 样品处理的目的和要求： a. 从缀合物中释放出来，测定总浓度b.介质组成复杂，干扰多，而组分微量，必须经预处理纯化和富集。c.为适应和符合测定方法所要求的灵敏度d.防止分析仪器污染劣化，提高检测器灵敏度，准确度，精密度和选择性。 样品制备时应考虑的问题：a.待测物理化性质与存在形式b.浓度范围c.样品测定目的d.选用生物样品类型e.预处理与分析结果之间的关系 样品预处理技术 一、有机破坏法：湿法破坏、干法破坏、氧瓶燃烧法 二、除蛋白法： 目的：a.使结合型的药物释放出来，以便测定药物总浓度。b.预防提取过程中蛋白质发泡，减少乳化的形成。c.保护仪器性能（如保护HPLC柱不被玷污），延长寿命. 1.加入与水混溶的有机溶剂：乙腈，甲醇，乙醇，丙醇，丙酮，四氢呋喃(广泛使用) 原理：使蛋白质分子内及分子间氢键发生变化而使蛋白质凝聚，促使结合药物的释放。 2.加入中性盐：硫酸铵，硫酸钠 原理：使蛋白质离子强度发生变化，将水置换出来，使蛋白质脱水而沉淀。 3.加入强酸：10%三氯醋酸 6%高氯酸 原理：PHPI时，蛋白质以阳离子形式存在，强酸与蛋白质阳离子形成不溶性盐而沉淀。 4.加入含锌或铜盐的沉淀剂：硫酸铜，硫酸锌（碱性） 原理：PHPI时，金属阳离子与蛋白质阴离子形成不溶性盐而沉淀。 5.超滤法：以多孔性半透膜为介质 原理：通过选用不同孔径的不对称性微孔膜，按截留分子量的大小可分离可溶性大分子物质。 6.酶水解法? 7.加热法：只能出去热变性蛋白 三、液液萃取法（LLE）和离子对萃取 原理：基于被测组分在不混溶的两种溶剂中的分配系数不同而得到分离。多数药物是亲脂性的，而血样或尿样中含有的大多数内源性杂质是强极性水溶性物质。因而用有机溶剂萃取一次即可除去大部分杂质，从大量的样品中萃取药物经浓集后作为分析用样品。 需考虑的问题： a.溶剂的选择和纯度的要求：考虑提取效率与选择性和操作是否方便 选择溶剂注意事项：1相似相容2对未电离形式可溶而电离形式不溶3沸点低，易挥散便于浓集4与水不容5无毒，不易燃烧6不易乳化7较高化学稳定性和惰性8不影响紫外检测 b.有机溶剂相和水相体积（一般1:1或1：2） c.水相的