法医病理学组织切片制作.ppt

法医病理学 组织切片制作 HE染色切片 一、目的要求? 掌握取材、固定、水洗、脱水、透明、浸蜡与包埋，切片制作。 （一）取材 1.取材快，新鲜，防止组织腐败。 2.取材刀锋利，垂直地切取，严禁挤压或用钳镊钳夹，以免使组织或细胞变形造成人为的破坏。 3.取材大小，lcm～3cm×1cm～2cm×0.3cm～0.5cm。材料过大在短时间内不易固定透，影响效果。 （二）方法： 1. 实质器官 心脏：心房、瓣膜、心室。可分别取病变部位带正常组织。可单独取心室肌，乳头肌，3～5块。 肺脏：左右两肺（五个肺叶）；可根据病变需要决定取材块数，特殊情况下为区别在不同肺叶上取材，可用形状做标志在记录时记清楚，5～7块。 肾脏：取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂，应区别左右肾，2～4块。 胰腺：取胰体部，必要时加取胰头、胰尾，2块。 肝脏：取长方形或三角形，2～3块。 脾脏：取材带被膜，2～3块。 脑：全脑（桥脑、延脑、小脑）、脊髓颈段及脉络丛，十一块，或根据具体情况决定： ①额极；②前后中央回；③海马；④内囊；⑤丘脑；⑥枕叶；⑦脉络丛；⑧桥脑；⑨延髓；⑩中脑； ?小脑。取材时要带上软脑膜、脑室膜或软脊膜因此刀要锋利。需要时取脊髓。 垂体：前、中、后叶和垂体柄，从前向后横切。 2．管腔脏器： 取材时注意方向，取管腔脏器的全层构造。 大肠、小肠：应考虑环行皱襞，沿肠管的长轴取（纵切）。 食管、气管：横切面为宜。 胃：常规取胃底。 取材后应将被膜面铺在滤纸上，然后入固定液内，防止或减少组织受压变形与收缩。 有病变的部位，应附带周围正常组织取材。 二、固定 （一）意义：是做好切片的重要步骤之一，如果首次组织固定不良，再重新固定效果不佳。 检材固定的关键：取材后尽可能地及时地将所取的材料进行固定，以防止其“死后”变化的进展，尽力使组织接近于生前状态。为了防止组织结构及成份的破坏和溶解消失，需要使其转变为不溶性物质，有利于组织结构保存--固定的基本意义。 固定的目的： 1. 阻止死后变化，防止组织的自溶与腐败。 2．保存组织的结构及成份。 3．媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同 亲和力，使细胞各部易于受色。 4．能使组织硬化，为制作薄切片奠定基础。 注意：材料块不能过大，固定器皿不易过小，固定液量不易过少，应是固定材料体积的20一30倍。 （二）固定液： 根据检验目的不同选择不同种类固定液，如糖原检查：不含水的固定液；电镜检查：锇酸固定液等；HE染色：甲醛。 固定液：用以固定组织的药剂。 固定液分类：单纯固定液，由一种药剂组成；混合固定液（或复合），由二种以上的药剂组成。 1．选择固定液的标准： ①具有强的穿透力，固定均匀，能迅速渗透到组织内部使组织细胞结构保持生活状态。 ②不使组织过度收缩与膨胀而变形。 ③能迅速使组织中的蛋白质、糖、脂肪等物质凝固成为不溶性物质。 ④使组织达到一定的硬度便于切片制作。 ⑤价格便宜，易购买，配制方便。 2．单纯固定液 乙醇（酒精）、甲醛（福尔马林）、重铬酸钾、苦味酸、锇酸、丙酮、冰醋酸 （1）乙醇（酒精）（alcohol） 优点： ①价格低，易购买，易溶于水，使用方便，95％浓度，无水乙醇100％； ②市售有两种：100%；95%； ③能硬化组织起固定作用； ④也是一种最常用的脱水剂。 固定用浓度在70％～80％，酒精浓度愈大组织收缩愈严重，浓度过低起不到固定作用。 缺点： ①穿透力小，由于被固定的组织表面硬化，固定液不容易渗透到组织中去，所以用乙醇固定的组织材料要小。 ②使组织严重收缩。 ③由于酒精能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白，核蛋白的沉淀物易溶于水，使细胞核核色不佳。。 ④溶解脂肪、血红蛋白和多种色素，脂肪染色必须制作冰冻切片。 2．甲醛：（福尔马林）（formalin） 最常用的固定液，一种还原剂，无色透明极易挥发有强烈刺激性气味的液体，不能与氧化剂混使用。可应用于组织学、组织化学、免疫组织化学等染色，最好用时现配。 商品甲醛：37％～40％甲醛水溶液。 固定液的浓度：4％～8％（习惯上称为10％或20％的福尔马林）。 固定时间：常温下固定24h～48h。快速固定，可加温到70℃～80℃或者加温煮沸10min即可。快速固定，组织块不宜过厚或过大，缺点是组织收缩较严重。 固定液配制：甲醛1份与9份自来水混合即为10％（4%）浓度的甲醛固定液。 优点：①渗透力较强；②组织收缩小；③细胞核染色较好。 缺点： ①质量较差的formalin在低温下久存容易产生一种白色的沉淀物称“三聚甲醛”（付醛），经氧化成为甲酸而使溶液呈酸性，影响细胞核染色。可在