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G六PD的临床生化化学检测;目 录
一、G6PD与G6PD缺乏症
二、G6PD的发病机制
三、G6PD的流行病学与遗传规律
四、G6PD临床生物化学检测
五、华南常见G6PD试剂盒的概况
六、美康G6PD调试经验
七、案例分享;一、G6PD与G6PD缺乏症;二、G6PD的发病机制;磷酸戊糖途经;谷胱甘肽还原型+氧化性物质 谷胱甘肽氧化型;三、G6PD的流行病学与遗传规律;四、G6PD临床生物化学检测;2、G6PD的检测方法
2.1 比色法(生化仪)
G6PD 活性校正值测定
原理:红细胞G6PD 催化G6P 生成6-磷酸葡萄糖内脂,后者很快氧化成6-磷酸萄糖酸(6-PGA) ,同时NADP 被还原成NADPH 。在340 nm 处监视NADPH 吸光度的升高,计算酶的活性。红细胞中还含有6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶( 6PGD),催化6-PGA 脱羧,生成核酮体糖-5-磷酸,同时使辅酶NADP 还原成NADPH。在本测定系统中,由6-PGA和G6 P 组成的底物系统,测得的酶活性,减去单独以6-PGA 为底物时测得的酶活性,代表真正G-6-PD 的活性。本法测定包含如下2 个反应式:
(1)G6P+ NADP+ 6PGA+NADPH+H+
(2) 6PGA+NADP+ R-5-P+NADPH+H++CO2
;血红蛋白测定
氰化高铁血红蛋白测定法
原理:
血液在Hb转化液中溶血后,除SHb外各种Hb均可被高铁氰化钾氧化为高铁Hb再与CN-结合生成稳定的棕红色氰化高铁Hb。HiCN最大波峰在540nm,最小吸收峰为504nm。特定标准条件下,毫摩尔消光系数为44L·mmol-1·cm。因此,根据标本的吸光度,即可测定Hb浓度。
HiCN 试剂:
氰化钾(KCN)
高铁氰化钾
无水磷酸二氢钾
特别提醒:该法是测定血红蛋白的标准方法,但是试剂中含有氰化钾剧毒物,操作时必须小心。实验后的废液也要小心处理。
;G6PD活力计算:
?G6PD=(G6PD+6PGD )—6PGD (U/L)
G-6-PD , U/g Hb= ?G6PD/Hb
意义:每克血红蛋白中G6PD的活性
参考值:
健康成年人,红细胞G6PD 活性(己校正
6-PGD) 8.34±1.59 U/g Hb
红细胞活6PGD性为6.8 - 12.0U/g Hb
注意一:NADPH比值法或G6PD/6GPD法,在上面基础上不采用两个指标相减,而是相除,原理是6GPD尚未报道在G6PD患者和正常人之间有差异,通过比值法筛查,一定程度上可以确认女性杂合子,也就是G6PD基因缺陷携带者。此法受到一些试剂厂家和医院青睐。
;G6PD 活性直接测定法
G6PD 活性校正值测定虽然能提供G6PD 活性真值和6GPD的活性,但在溶血性疾病的检查中尚未发现红细胞6PGD活性正常而掩盖G6PD活性缺乏的现象。因此,就临床使用而言,G6PD活性的的简易测定法己能满足临床。
原理:G6P+ NADP+ 6PGA+NADPH+H+
在波长340 nm 处监测NADPH 的吸光度增高,计算G6PD活性。
活性计算: G-6-PD , U/g Hb= G6PD/Hb
参考值:健康成年人,红细胞G6PD 活性为8 -18 U/g Hb 。
注意:医院可以根据需要决定是否需要6PGD校正。;其他方法:
2.2高铁血红蛋白还原试验:
2.3免疫斑点杂交法:
G6PD活性测定注意事项:
1、Mg2+是G6PD的激活剂,铜离子和锌离子有轻度抑制作用,汞离子和对氯汞苯甲酸有完全抑制作用,因此日常使用中尽量避免抑制剂的污染。
2、避免样本溶血,样本溶血后G6PD活性不稳定,影响其活性测定。溶血后活性降低很快,25min内需要及时测定。
;五、华南常见G6PD试剂盒概况;不同厂家试剂盒比较;长春汇力与以上有所区别,具体如下:
全血G6PD: 638-1980U/L 4.2-14.5U/gHb
脐带血或末梢血G6PD:832-2460U/L 4.9-14.5U/gHb
血清G6PD:0-5U
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