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研究生开题报告 云南三七对TGFβ-1 诱导人增生性瘢痕成纤维细胞smad信号转导及I型胶原合成影响的研究 一、研究背景及意义 瘢痕组织是人体创伤修复过程中的一种自然产物。人类大多数的组织损伤通过瘢痕形成来修复。 分类:表浅性瘢痕 病理性瘢痕 病理性瘢痕 瘢痕的危害性 瘢痕常常由于收缩和牵拉，从而引起受损组织的畸形及功能障碍。严重影响患者的容貌和身心健康。探索确切有效、安全的治疗手段一直是医学领域关注的热点。 拓展 肾内科 呼吸内科 风湿免疫科 消化和/或感染科 国内外瘢痕研究现况： 遗传相关机制 成纤维细胞生物学功能异常 细胞凋亡与增殖失衡 细胞信号转导系统中转化生长因子β信号通道异常 生物活性因子 胶原代谢障碍 TGF-β1 是目前已知的与瘢痕过度增生关系最密切的细胞因子，国内外大量的实验充分证实TGF-β参与了病理性瘢痕的发病；而且研究表明全身可致所有主要器官(如肺、肝、肾等)纤维化。 瘢痕中的成纤维细胞对TGF-β1敏感性远远超过正常真皮中的成纤维细胞；同时，TGF-β1介导的胶原蛋白合成的增加伴随着Ⅰ型前胶原mRNA水平的提高。 TGFβ-1作用 刺激成纤维细胞增殖 促进胶原合成 趋化成纤维细胞和炎细胞向伤口聚集 诱导肉芽组织生长 致纤维化因子和“开关”性分子角色 SMAD通路 特异性下游信号传导分子 磷酸化后进入细胞核启动靶基因表达 　Smad2和Smad３起正性调节作用 作用机制 TGF –β1与细胞表面的特异受体结合，导致细胞内调节蛋白丝氨酸和苏氨酸基磷酸化，在异聚体复合物形成的基础上，smad蛋白移入核内，在核内蓄积引起靶基因的转录。从而激活细胞核内的I 型前胶原基因5’端特异的启动子来启动基因的表达。 中医中药治疗的广阔前景 丹参 灯盏细辛 三七 三七 “金不换” “南国神草” “参中之王” 云南白药 三七 五加科人参属 总皂苷、黄酮、甾醇、多糖 云南省文山州 国内研究 三七总甙： 1、改变细胞周期，抑制增生性瘢痕成纤维细胞TGF-β1的表达 2、抑制成纤维细胞增殖及胶原合成而具有体外抗纤维化作用 三军大 MTT 免疫组化 尚待解决 三七作用于细胞周期和抑制TGF-β1表达 机制较复杂 分子生物学 意义 三七总甙具有一定的抗纤维化作用，防治肾间质纤维化 ，抗肺纤维化 ，抗肝纤维化 ，抑制增生性瘢痕，可能成为治疗增生性瘢痕及纤维化的有效药物。 二、研究目的 通过对增生性瘢痕成纤维细胞、正常人包皮成纤维细胞及人体其他部位的成纤维细胞生物学行为进行研究，观察文山三七对增生性瘢痕纤维化及内脏组织器官纤维化的干预作用，拓展用于肺、肝、肾等全身主要脏器的纤维化的防治。 三、技术路线和研究方案 研究方案 1.收集增生性瘢痕病人、正常人包皮组织及其他正常皮肤组织标本。建立成纤维细胞体外培养体系。 ２.观察上述三种不同来源成纤维细胞生长动力学特性。 MTT比色法检测细胞增殖和细胞毒性。 3.采用 TGFβ-1作为诱导剂，采用RT-PCR法，研究三七总甙对不同来源成纤维细胞Ｓmad通路信号传导中关键分子Ｓmad2、Ｓmad3、ＴＧＦβ-1有无影响。 4.在上述实验基础上，采用Ｗestern　BLotting方法着重观察三七总甙对成纤维细胞功能产物如Ｉ型胶原合成的影响。 5.注意对比观察不同来源成纤维细胞对干预因子反应的差异。 四、预期成果 通过结合学科特点优势揭示云南文山三七总甙对病理性瘢痕成纤维细胞Ｓmad通路信号传导及Ｉ型胶原合成的影响，以期明确该药抗纤维化的分子药理学作用机制。 五、可行性 学科优势 前期研究 合作单位 * * 研 究 生： XX 导 师： XX 教 授 包括增生性瘢痕（ Hypertrophic Scar，HS）和瘢痕疙瘩（ Keloid，K），是因成纤维细胞过度增殖，生长失控，胶原过度沉积导致真皮纤维化。K 表现为侵袭性浸润生长，手术切除后易复发。而HS却随时间推移有自然软化趋势，手术切除后不易复发。 建立 NSF、HSF细胞培养体系 三七总甙 ＴＧ