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化学发光法技术概要及自动化免疫分析仪技术要点 科华生物研发中心光免小组 李 基 2010.7.14 化学发光法反应基本原理 抗原-抗体反应 抗体能够特异性识别相对应的抗原，并与之结合，这种反应称之为抗原抗体反应。 抗原-抗体反应具有特异性、敏感性、可逆性等特点。 酶促底物发光 将检测试剂中的抗原或抗体用碱性磷酸酶（AP）加以标记，通过发光底物测定相对光子数（RLUs值），来检测目标抗体或抗原的浓度。 化学发光法反应模式 一步法 （15min反应+15min显色） 夹心法 竞争法 两步法 （15min+15min反应+15min显色） 间接法 捕获法 一步法：夹心法 一步法：竞争法 两步法：间接法 两步法：捕获法 化学发光法反应介质 固相介质：磁珠 酶标记物：碱性磷酸酶（AP） 发光底物：AMPPD 磁珠 基本材质：Fe3O4/Fe2O3，褐色磁性物质 直径大小：1μm左右 磁珠类型： 分为氨基磁珠、羧基磁珠、苯甲磺酰基磁珠和链霉亲和素磁珠等四种磁珠 磁珠特性： 不同供应商的不同类型磁珠，亲水性不同，在溶液中的状态也不同，所需的磁吸时间也不同。磁吸时间过短，会造成丢磁；磁吸时间过长，会造成磁珠聚集，不宜分散。 碱性磷酸酶（AP）及发光底物 RLUs值范围 板式发光范围1,000-20,000,000RLUs 管式发光范围0-10,000,000RLUs 分辨率要求 对于测定不同浓度的标本，至少在试剂盒标准曲线范围内能明显区分两者的RLUs。 市场上主要全自动仪器机型及应用（1） 雅培公司 Axsystem: 基于粒子的荧光偏振技术。 Architect系列：基于磁分离的化学发光检测。 拜尔公司 ADVIA Centaur：基于磁分离的化学发光检测。 贝克曼公司 Access系列：基于磁分离的化学发光检测。 生物梅里埃公司 Vidas系列：管式包被的酶促荧光检测。 市场上主要全自动仪器机型及应用（2） 德灵公司 Dimension系列：多种技术的复合体，基于粒子的酶标检测及粒子增强与非增强的免疫比浊测定等。 DPC公司 Immulite系列：基于粒子离心分离技术的化学发光检测。 强生公司 Vitros系列：管式包被的化学发光检测技术。 罗氏公司 Elecsys系列：基于磁分离的电化学发光检测技术。 各种全自动仪器主要技术参数 全自动仪器实验流程要求（1） 主要实验流程（1）——一步法 样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟； 洗涤3-5次； 加入发光底物，5-15分钟检测。 全自动仪器实验流程要求（2） 主要实验流程（2）——一步半法 样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟； 加入试剂3， 37℃孵育5－30分钟； 洗涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。 全自动仪器实验流程要求（3） 主要实验流程（3）——两步法 样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟； 洗涤3-5次，加入试剂3（或试剂3+试剂4）， 37℃孵育5－30分钟； 洗涤3-5次； 加入发光底物， 5-15分钟检测。 全自动仪器其他要求 样品加量10μl~200 μl，试剂加量50μl~200 μl，随检测项目不同而有所增减。 洗涤液加量不小于350 μl。 发光检测恒温为宜。PMT能达到实验所需要求。 带有内置计算浓度功能及校准功能。 需要解决的关键点（1） 洗涤模块： 洗涤次数？洗涤液种类？洗涤液体积？洗涤是否带超声？洗涤流速？是否预洗？加液速度？ 磁分离模块： 底吸还是侧吸？磁力大小的选择？磁分离时间？永磁还是顺磁？ 需要解决的关键点（2） 混匀模块： 试剂架的混匀功能？混匀频率和混匀方式？反应槽是否带有混匀功能？ 样品针和试剂针： 怎样防止样品与试剂，试剂与试剂之间的交叉污染？怎样保证加液量准确？怎样防止针头堵塞？ 谢 谢 观 看 ！ * * 55 9 Elecsys 1010 88 9 Elecsys 2010 90 24 Vitros 200 35 Immulite2000 120 15 Immulite 165－700 16 Dimension RXL 250 16 Dimension Xpand 60 30 Vidas 100 15 Access2 100 15 Access 240 18 ADVIA Centaur 1200 15.6 Architect ci8200 200 15.6 Architect i2000 68-120 10 Axsym 检测通量（T/hour） 第一个结果报告时间（min ） HCG *