11年血型鉴定与交叉配血.pptVIP

 ABO、Rh血型鉴定　　与交叉配血试验技术 华中科技大学同济医学院检验系 曹奎杰 一 红细胞ABO血型鉴定 ABO血型鉴定的原理 利用RBC凝集实验，可准确鉴定RBC表面是否存在A抗原或者B抗原（正向定型即细胞定型），以及血清中有无抗-A或抗-B（反向定型即血清定型），通过正反定型可将人类血型分为Ａ、Ｂ、Ｏ、ＡＢ型四种。 正向定型（forward typing）/细胞定型（cell grouping ）：用已知血型特异性的抗体试剂鉴定RBC的抗原 反向定型（reverse typing）/血清定型（serology grouping ）：同时用已知血型的试剂RBC鉴定血清中的抗体 正反定型正常情况应相符 正向定型 反向定型 ABO血型鉴定的方法 盐水介质法（试管法、平板法） 微柱凝胶法 微量板法（U型、V型） 分子生物技术 试管法红细胞ABO血型鉴定 样本 抗凝或不抗凝待检血液（血清与RBC已分离或分层好） 可选试管 试剂 单克隆或多克隆的抗-A试剂；单克隆或多克隆的抗-B试剂；抗-A,B（供选择） 要求：1、高度特异性 2、抗A、抗B效价均不低于1:128 3、高亲和力 4、冷凝集素效价1:4以下 5、无任何污染 2%～5%的A型、B型和O型RBC盐水悬液 试剂血清 红细胞悬液的配置 实验操作步骤 正向定型 反向定型 结果判断 平板法红细胞ABO血型鉴定 玻片 纸板 陶瓷板 搪瓷板 实验操作步骤 加试剂血清 一滴 加RBC悬液一滴 轻摇平板2min 判断结果 结果判断 结果判断 有可疑结果应用试管法重新实验 不要混淆干燥的边缘与凝集 全自动微板法 检测技术产生于全自动血液样品系统+凝集实验的扫描酶标仪问世 通过标准化加样、孵育、离心、悬浮、静止、以及反应前后吸光度值增加数值的计算，从而达到对血型进行正、反定型 应用ABO 血型自动化检测方法进行正反定型试验,一次判读正确率在99. 8 %以上,且能提高检测灵敏度,使弱凝集样本更易显现 全自动微板法 改变了传统的手工操作、肉眼判读结果的检测方法 具有快速、准确、自动化程度高等优点,适合批量操作 血型微量化检测具有节约大量昂贵抗血清、缩短检测时间、操作程序简单等优点, 目前在各大采供血机构已得到广泛应用 但是亦有将B3亚型伴抗-B 误判为O 型的个案报道,说明ABO 血型自动化检测系统设计对特殊的ABO 亚型正反不一的判读有待进一步完善 ABO血型鉴定方法学评价 平板法 优点：操作简单，实用于大量标本 不足：?反应时间长，易污染 ?不适合检查血清中抗体（患者血清抗体效价低，不易引起RBC凝集） ?不能准确进行ABO血清定型 试管法 快速，借助离心力促进RBC凝 集，适用于急诊检查 ABO血型试验正、反定型不一的原因 技术问题 血清因素 红细胞因素 其他因素 ABO血型试验正、反定型不一的原因 ——技术原因 离心过度或不足 细胞与血清反应比例不适当 阳性反应产生溶血现象未能识别（怎样区别），导致假阴性结果 试剂污染或失效 器材不清洁等 ABO血型试验正、反定型不一的原因  ——血清因素 异常的血浆蛋白：血浆白、球蛋白比例异常，高浓度的纤维蛋白原等，能导致缗钱状RBC形成，造成假凝集现象 低丙种球蛋白，抗体减弱 待检血清有不规则抗体存在，与试剂A、B细胞上的抗原起反应 ABO血型试验正、反定型不一的原因  ——血清因素 患者输入了高分子的血浆代替品或注射造影剂等 近期大量非同型血浆置换 血清抗体效价太低，亲和力不强：如新生儿（新生儿不宜反定型） 、老年人 ABO血型试验正、反定型不一的原因 ——RBC因素 RBC致敏状态：受免疫球蛋白致敏 疾病使RBC上抗原减弱或抗原位点减弱：白血病，难治性贫血，恶性肿瘤 获得性B：革兰氏阴性菌感染，RBC可获得“类B”的活性 异常基因型：ABO亚型，A、B抗原可能为弱抗原，难以检出 ABO血型试验正、反定型不一的原因