植物组织培养三植物器官和组织培养.ppt

能得到无病毒的植株的主要原因是： 病毒侵染植株后，通过胞间连丝转移到其他细胞中，或依靠筛管进行转移。因此，病毒在患病植株上的分布是不均匀的，即老的成熟器官中病毒含量高，幼嫩未成熟的器官中病毒含量较低而茎尖分生组织，在细胞没有充分分化以前不受侵染，故几乎不带病毒。 1、培养技术 ①茎尖组织的分离 从未发病植株上，取正在生长的顶芽、萌发芽和球茎的中心芽。材料用70%的酒精浸没几秒到数十秒钟，再在稀释20倍的次氯酸钠中浸5—10分钟，用无菌水冲洗数次后，供组织分离用。 在无菌条件下进行无菌操作，把芽放在解剖镜下，用镊子、刀子、解剖针等工具，逐层把芽外面的幼叶和叶原基除去，使生长点露出，这时要细心，不要弄伤顶端圆锥体，用利刃切下含有1—2个叶原基的0.1-0.2mm长的生长点，然后接种到琼脂培养基上，切取生长点的大小，是培养能否取得成功的关键，原则是在生长点不带病毒的情况下，尽量取稍大些的生长点，这样易于培养成功。 ②培养： 常用的培养基有White(1943)，Morel(1995)，MS培养基等等。 2，4-D，IAA，NAA等生长素是必须的，它们能有效地促进芽的生长发育，但是浓度并能太高，一般用0.1mg/l左右即可，高于1.0mg/L，往往产生畸变芽或形成愈伤组织。 接种后的生长点，在培养基上生长很慢，再生植株往往需要几个月甚至一年以上。因此，注意满足其培养条件是十分重要的。生长点培养要求24—27℃的温度，最好给以日夜温差，适当的光周期和光。由于培养时间长，应注意培养基保湿，一般可用防湿的铝箔或塑料薄膜包裹解决。 茎尖经过适当培养后，可能发育的方向为： 芽萌发； 产生胚状体； 产生不定器官； 形成愈伤组织 ③脱毒试管苗植物的移植 Ⅰ嫁接—扦插法 把试管苗剪下，先嫁接在砧(zhen)木上，然后再扦插成活，最后长成植株。 Ⅱ移植法 当试管苗长到数厘米和形成较多的根系时，打开试管盖，放在室内窗口处炼苗2—3天。然后小心取出苗，洗去根上的琼脂以免滋生细菌，再移栽至小花盆中。 病毒植物的鉴定 2、无菌苗的增殖 ⑴增殖的途径 一是诱导形成大量的胚状体 二是诱导形成大量的不定芽 三是促进腋芽的快速形成。 2、无菌苗的增殖 优缺点： 第一、二种途径的好处是增殖速度快，但会产生变异， 第三种途径的好处是不会产生变异，能保持品种优良特性，且方法简便，可在各种植物上使用，但增殖速度不如前二者。 若用于育种，以第一、第二种途径有利，而用于良种快速增殖，以第三种途径有利，主要是要保证良种的优良品性，不产生变异。目前已广泛采用，每年每个芽可增殖10万株乃至上百万株。 ⑵腋芽增殖的原理 高等植物的每个叶腋中都有腋芽存在，通常由于顶芽的存在，顶端优势阻止腋芽的生长，但在一定的条件下可以使它生长，如除去顶芽或使用生长激素，可以解除顶端优势，腋芽便不断分化和生长，逐渐形成芽丛。 若反复切割这些腋芽和移植到新的培养基中继代培养，就可在短期内得到大量的芽。 ⑶影响增殖成功的关键因素 A、细胞分裂素 在腋芽增殖上的主要措施是用细胞分裂素抑制顶端优势，促进腋芽生长发育，所以在这一阶段培养基中添加细胞分裂素是必须的。 实践证实，除个别的例子外，加入细胞分裂素是行之有效的。6-BA对促进腋芽增殖是最有效，依次为KIN和2ip。一般浓度在0.25mg/l以上，少数用1.0mg/L，个别的用5mg/L。 B、生长素 生长素虽不能促进腋芽增殖，但可改善苗的生长，因此，许多种植物也都加入一定的生长素类物质。其中使用最多的是NAA，依次为IBA、IAA和2，4-D，它们的使用浓度多为0.5mg/L以下。 ⑶影响成功的关键因素 C、GA GA对芽的伸长有促进作用，故常加入少量的GA，使用浓度为0.5mg/L。 D、光照 光照条件也十分重要，这一阶段必须保持适当的光周期(16小时光照)和光强(2000-3000Lux)，以利芽的再生和生长。 ⑶影响成功的关键因素 3、无菌苗的生根 这个阶段的目的是使再生的大量试管苗形成根系，获得完整的植株，在前两阶段以长苗为目的，使用的生长激素往往不利于生根的发生和生长，因此在这个阶段，必须创造一个适于根的发生和生长的条件。 主要是降低或除去细胞分裂素，而加入或增加生长素。 影响生根成功的关键因素 ①培养基的盐浓度 试管苗的生根，对基本培养基的种类要求不严，一般的培养基都可用于诱导生根，但对其含盐浓度要适量加以稀释。前面的几种培养基中，除White培养基外，都富含N、P、K盐，它们都抑制根的发生。因此，应将它们降低到1/2、1/3或1/4，甚至更低的水平。就可得到理想的生根结果。 ②