手性药物高效液相色谱拆分课件.ppt

手性药物高效液相色谱拆分; 手性药物的高效液相色谱拆分方法包括薄层色谱、气相色谱、液相色谱、超临界流体色谱和电泳在内的几乎所有色谱和准色谱手段都已应用于对映体拆分。一般分为间接法与直接法。;直接法; 手性固定相是由担体键合高光学纯度的手性异构体制作 而成，检测物在手性固定相表面形成非对映体对，根据其稳 定常数不同而获得分离。 用于色谱分离的手性固定相已经被大量研究，已有100多 种液相色谱固定相被商业化。目前所研究的高效液相色谱手 性固定相有 7大类。 其中主要应用的有：Pirkle型CSP、环糊精CSP、多糖类 CSP、蛋白质CSP 。 ;CSP种类; 优点：分离时间短，而手性选择性和拆分能力 高，多数药物在分离前都不需要进行衍生化反应， 分 离方法直接。 局限性：色谱柱价格昂贵，部分固定相还存在稳 定性差，柱容量低，柱强度差等缺点，且根据不同手 性药物的性质不同，选用的分析方法也不同。 ;手性流动相( C M P ) 拆分法;手性试剂衍生化法 ( CD F);一些手性衍生化试剂和应用 ; 优点：可使用已有的非手性同定相， 花费少，通过选用具有 强烈紫外吸收或荧光吸收的手性试剂， 可提高检测敏感度， 而 且多数的衍生化试剂具有良好的对热及水的稳定性。 局限性：是手性试剂需要有高的光学纯度，各对映体的衍生 化速率及平衡常数应一致， 要求衍生化反应迅速、 彻底， 否 则影响定量结果。衍生化和色谱分析过程中应不发生消旋化， 外消旋药物需要有可被衍生化的基团， 此外衍生化法步骤较烦 琐， 衍生化试剂 绝大多数毒性相当大， 而且该方法难以实现 分析的自动化。 ;色谱柱： 2 5 0× 4 .6 m m i .d ，(制备醋酸纤维素酯类液相色谱固定相，涂渍在修饰硅胶表面)， 采用湿法自行装柱。 色谱条件：以正己烷 一异丙醇的混合溶液( 体积比为9： 1 ) 作流动相， 流速为 0 . 5 mL ／ m i n ，柱温3 0 ℃ ,紫外检测波长为2 5 4 n m。 柱性能评价：用流动相冲洗该色谱柱， 直到基线稳定． 以 1 ， 3 ， 5——叔 丁基苯测定死时间， 以苯测其理论塔板数为 2 2 9 6 9 m—1 。 ; 药物扑尔敏溶解在流动相溶剂中， 配制的浓度为3 .2 mg／mL 。 扑尔敏的结构示意图1所示。;在上述色谱条件下，分别以0 . 4和0 .5uL的进样量进样分析;结果表明： 此柱在分离药物扑尔敏时，随着进样量的增大，此柱有些过载，分离效果不佳。一般来说，在分离物进样过载的情况下，样品的分离效果较差，随着进样量的降低，样品的分离更充分。 这是因为手性分离是 一个吸附和分配的过程， 在进样量过载的情况下， 没有足够的手性基团与分离物进行作用 ， 因而对映体的分离就不充分。; 雷诺嗪的拆分;随着流速的下降， 分离度逐渐升高。; 通过控制流速、流动相等方法对雷诺嗪的拆分进行了下述研究。 通过虽然上法雷诺嗪得到非常好的拆分，但是拆分时间过短，容量因子k太小(k1)，且无法根据需要调节。 于是考察醇类系统对雷诺嗪的手性分离的影响。;;; 实验结果显示无论在正相条件下还是在反相条件下，涂敷纤维素—三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性固定相均可以很好的拆分外消旋体雷诺嗪。 且醇的立体结构、极性对雷诺嗪的手性拆分均有影响。