实训7紫外线变选育-淀粉酶高产菌株.ppt

微生物与发酵工艺 实训七 紫外线诱变选育α-淀粉酶 高产菌株 一、实验目的 1.学习菌种的物理因素诱变育种基本技术。 2.通过诱变技术筛选出高产ɑ-淀粉酶的菌株。 二、实验原理 二、实验原理 本实验以紫外线处理产淀粉酶的枯草杆菌，通过透明圈法初筛，选择淀粉酶活力高的生产菌株。 三、实验材料 三、实验材料 3. 培养基和试剂 ① 无菌水、75%酒精 ② 0.5％碘液 碘片1g、碘化钾2g、蒸馏水200mL，先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘片全部溶解后，加足水即可。 ③ 选择培养基 可溶性淀粉2g，牛肉膏1g，NaCl 0.5g，琼脂2g，蒸馏水100mL，pH6.8～7.0，121℃灭菌20 min。 ④ 肉汤培养基 牛肉膏0.5g，蛋白胨1g，NaCl 0.5g，蒸馏水100mL ，pH7.2～7.4，121℃灭菌20 min。 四、实验步骤 3.诱变处理 将菌悬液倾于无菌培养皿中（内放一个磁力搅拌棒），置电磁力搅拌器上于超净工作台紫外灯下（距离30cm）照射0.5-1min。 4.取0.1-0.2mL诱变后菌悬液于选择培养基平板上，用涂布器涂匀。置37℃暗箱培养48h。 5.在长出菌落的周围滴加碘液，观察并测定透明圈直径（C）和菌落直径（H），挑选C/H值最大者接入斜面保藏。 五、注意事项 六、结果与讨论 * * 紫外线是一种最常用有效的物理诱变因素，其诱变效应主要是由于它引起DNA结构的改变而形成突变型。紫外线诱变，一般采用15W或30W紫外线灯，照射距离为20-30cm，照射时间依菌种而异，一般为1-3min，死亡率控制在50％-80％为宜。被照射处理的细胞，必须呈均匀分散的单细胞悬浮液状态，以利于均匀接触诱变剂，并可减少不纯种的出现。同时，对于细菌细胞的生理状态则要求培养至对数期为最好。 1. 菌种 产淀粉酶枯草芽孢杆菌 2. 器材 装有15W或30W紫外灯的超净工作台、电磁力搅拌器（含转子）、低速离心机、培养皿、涂布器、10mL离心管、（1、5、10mL）吸管、250mL三角瓶、恒温摇床、培养箱、直尺、棉签、橡皮手套、洗耳球 1.菌体培养 取枯草芽孢杆菌一环接种于盛有20mL肉汤培养基的250mL三角瓶中，于37℃振荡培养12h，即为对数期的菌种。 2.菌悬液的制备 取5mL发酵液于10mL离心管中，以3000 r/min离心10min，弃去上清液。加入无菌水9mL，振荡洗涤，离心10min，弃去上清液。加入无菌水9mL，振荡均匀。 四、实验步骤 1.紫外线对人体的细胞，尤其是人的眼睛和皮肤有伤害，长时间与紫外线接触会造成灼伤。故操作时要戴防护眼镜，操作尽量控制在防护罩内。 2.空气在紫外灯照射下，会产生臭氧，臭氧也有杀菌作用。臭氧过高，会引起人不舒服，同时也会影响菌体的成活率。臭氧在空气中的含量不能超过0.1％-1％。 1.利用紫外诱变育种，应注意哪些因素? 2.为什么诱变育种后要挑选C/H值最 大者接入斜面保藏? * * * * *