JC1线粒体膜电位的检测方法.pdf

产品说明书 JC-1 线粒体膜电位检测试剂盒 产品组成： 产品编号 BB-4105-1 BB-4105-2 BB-4105-3 规格 20 assays 50 assays 100 assays JC-1 100ul 250ul 500ul 10×孵育缓冲液 4ml 10ml 20ml 产品简介： 线粒体膜电位的下降是细胞凋亡早期的一个标志性事件。JC-1 是一种广泛用于检测线 粒体膜电位(mitochondrial membrane potential)△Ψm 的理想荧光探针。可以检测细胞、组织 或纯化的线粒体膜电位。在线粒体膜电位较高时，JC-1 聚集在线粒体的基质中，形成聚合 物，488nm 激发时的最大发射波长为 590nm，可以产生红色荧光，在流式图上表现为 FL1 和 FL2 双阳性；在线粒体膜电位较低时，JC-1 不能聚集在线粒体的基质中，此时 JC-1 为单 体，488nm 激发时最大发射波长为 527nm，可以产生绿色荧光，形成流式图中所有细胞 FL1 均为阳性。凋亡细胞则大多为 FL1 单阳性。这样就可以非常方便地通过荧光颜色的转变来 检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。 贝博线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)可以快速灵敏地检测细胞、组织或纯化的线粒体膜 电位变化，可以用于早期的细胞凋亡检测。试剂盒染料与其他的阳离子染料如 DiOC6(3)和 罗丹明 123 相比，特异性更高，对线粒体膜电位变化的特异性高于质膜电位变化，对线粒体 去极化检测的检测一致性更好；红绿色荧光强度比率只受线粒体膜电位的变化，不受线粒体 大小，形状，密度的差异干扰；检测灵敏度强，对细胞应激反应的微小异质性都能辨别； 使用方法： 悬浮细胞 1、孵育缓冲液和 JC-1 染色工作液的配制：根据样品数按下列比例配制孵育缓冲液和 JC-1 染色工作液。 取 100ul 10×孵育缓冲液加 900ul 无菌纯水稀释，混匀并预热至 37℃， 即成 1×孵育缓冲液；在 500ul 1×孵育缓冲液中加入 5ul JC-1，涡旋混匀配成 JC-1 染色 工作液； 2、收集样本细胞以及阴性、阳性对照细胞。细胞数量在 2-5X105 个。 3、用 PBS 洗涤细胞两次。离心收集细胞。 4、用 500ul JC-1 染色工作液将细胞重悬，37℃，5% CO2 的培养箱中孵育 15 分钟。 5、常温离心收集细胞。 6、用 500ul预热的孵育缓冲液将细胞重悬。 7、用流式细胞仪或荧光分光光度计检测分析结果，或者用荧光显微镜或激光共聚焦显 微镜观察结果。 贴壁细胞 对于贴壁细胞，可以先收集细胞，重悬后参考悬浮细胞的检测方法。 本产品仅供科学研究使用！请勿用于临床、诊断、食品、化妆品检测等用途！ 产品说明书 纯化线粒体 1、把配制好的 JC-1 染色工作液