第十章、维生素测定.ppt

原理 硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成硫色素（吡哆色素），在紫外线下，硫色素发出蓝色荧光。在给定的条件下，以及没有其他物质干扰时，此荧光强度与硫色素含量成正比。 荧光测定条件： 激发波长 365nm；狭缝 5nm. 发射波长 435nm；狭缝 5nm. 原理 核黄素在440-500nm波长光照射下发生黄绿色荧光，在稀溶液中，荧光强度与核黄素浓度成正比。在波长525nm下测定其荧光强度。试液再加入低亚硫酸钠(连二亚硫酸钠 Na2S2O4),将核黄素还原成无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。 测定 于激发波长440nm，发射波长525nm，测量样品管及标准管的荧光值。 维生素B 6的测定 原理 微生物的生长与它们对某些特定的维生素的需求有关，因此在维生素分析中，将某些微生物在含维生素的样品抽提液中的生长速率，与在含已知量维生素对照溶液中的生长速率进行对比，从而得出样品中该维生素的含量。生长速率可通过测定浊度、产酸量、质量变化或呼吸作用，测定浊度是最常用的方法。维生素B6的含量在2ng/mL以内，其浓度对卡尔斯伯酵母菌的生长速率有良好的线性关系，可以定量测定。 测定 在550nm波长下测定吸光度值。绘制维生素B 6标准曲线，计算 2，4-二硝基苯肼法 （GB第二法） 2、氧化 取25ml 样品滤液→2g活性C →振摇1min →过滤 →取滤液10ml →10ml2%硫脲溶液→样品氧化液 3、呈色反应 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （三）维生素C的测定 维生素C是一种己糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以又称作抗坏血酸。维生素C广泛存在于植物组织中，新鲜的水果、蔬菜，特别是枣、辣椒、苦瓜、柿子叶、猕猴桃、柑桔等食品中含量尤丰富。 维生素C具有较强的还原性，对光敏感，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，仍然具有生理活性。进一步水解则生成2，3 -二酮古乐糖酸，失去生理作用。 VC检测技术 2,6－二氯靛酚滴定法 简便/须脱色、干扰多（深色、其他还原性物质） 二甲苯－二氯靛酚比色法 深色 荧光法：准确度高，较复杂 2，4-二硝基苯肼法 还原型VC的测定 总VC 的测定 总VC=氧化型VC+还原型VC+二酮古乐糖酸 少 氧化+还原+二酮古乐糖酸 操作复杂，结果易受影响 氧化型+还原型 (1) 2,6-二氯靛酚滴定法 1．原理 还原型抗坏血酸可以还原染料2，6-二氯靛酚。该染料在酸性溶液中呈粉红色(在中性或碱性溶液中呈蓝色)，被还原后颜色消失。 还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准染料液的量，与样品中抗杯血酸含量成正比。 2、试剂 ⑴ 1%草酸溶液：称取10g草酸，加水至1000mL； ⑵ 2%草酸溶液：称20g草酸，加水至1000mL； ⑶ 维生素C标准液：准确称20mgVC溶于1%草酸中，并稀释至100mL，吸5mL于50mL容量瓶中，加入1%草酸至刻度，此溶液每毫升含有0.02mgVC； ⑷ 0.02% 2，6-二氯靛酚溶液：称取2，6-二氯靛酚50mg，溶于200mL含有52mg碳酸氢钠的热水中，冷却后，稀释至250mL，过滤于棕色瓶中，贮存于冰箱内，应用过程中每星期标定一次。 标定一 吸标液（VC）5mL于三角瓶→加6%KI溶液0.5mL→加1% 淀粉3滴→用0.001mol KIO3标液滴定到淡兰色。 计算： 抗坏血酸浓度（mg/mL）=（V1×0.088）/V2 V1 - 滴定时消耗0.001mol KIO3标液的体积（mL） V2 - 维生素C重量（g） 0.088 -1mL 0.001mol KIO3标液≈维生素C的量（mg/mL） 标定二 吸5mL已知浓度VC标液 → 加5mL1%草酸 → 用染料2，6-二氯靛酚滴定至溶液呈粉红色，在15秒不褪色为终点 计算：每毫升2，6-二氯靛酚相当于维生素C的毫克数等于滴定度（T） T= （C × V1）/?V2 C - 维生素C的浓度（mg/mL） V1 -维生素C的体积（mL） V2 -消耗2，6-二氯靛酚的体积（mL） 样品测定 提取：称样50g→加2%草酸100mL→入捣碎机中处理→过滤→颜色若深可加白陶土 滴定：吸5mL样液→于三角瓶→用染料滴定至粉红色→15秒内不褪色 计算： VC（mg/100g）=（V × T）/ W??× 100 V -消耗染料体积（mL） T -1mL染料所能氧化维生素C的毫克数 W- 滴定时所有滤液中含有样品的克数 4