环维黄杨星D在大鼠体内的吸收、分布和排泄的研究排泄的研究.doc

PAGE PAGE 9 环维黄杨星D在大鼠体内的吸收、分布和排泄的研究 文红梅　张正行（中国药科大学药物分析教研室，210009） 李伟　蔡皓（南京中医药大学中医药研究院，210029） 摘要：本文研究了环维黄杨星D在大鼠体内的吸收、分布和排泄的体内过程。采用HPLC-MS(TOF) 法建立了生物样品（血浆、组织器官、尿液、胆汁、粪便等）中环维黄杨星D的含量测定方法，进行了方法学考察。 大鼠生物样本（血浆、十一个组织匀浆、尿液、粪便匀浆、胆汁）中加入内标多奈哌齐后碱化，以液-液萃取法提取样品后，采用液相色谱-飞行时间质谱联用技术，以电喷雾（ESI）作为接口技术，选择环维黄杨星D的准分子离子（[M+H]+，m/z403）和内标多奈哌齐的准分子离子（[M+H]+，m/z380）作为测定离子，测定大鼠血浆中环维黄杨星D的浓度。优化的色谱条件：Lichrosper CN柱为色谱柱，甲醇-醋酸盐缓冲液（80∶20）为流动相，CVB-D与内标物分离完全，峰形对称，内源性物质不干扰样品测定。环维黄杨星D血浆浓度0.5～200ng·ml-1线性关系良好（r=0.9999），组织浓度1～400ng·ml-1线性关系良好；尿液、粪便、胆汁浓度1～400ng·ml-1线性关系良好；提取回收率均高于80%。该测定方法具有灵敏、专一和快速的优点，符合生物样品分析要求。 选用216只Sprague-Dawley大鼠灌胃(ig)环维黄杨星D，三个给药剂量5、10、20 mg·kg-1的血药浓度-时间曲线符合一级吸收的二室模型，其吸收相、分布相、消除相半衰期分别为T1/2Ka1.22±0.34h， T1/2α2.02±0.28h， T1/2β19.59±0.90h，Tmax为2.56h±0.62h，AUC分别为341.94、766.12、1836.53ng·h·mL-1。 对大鼠体内十一个脏器与组织（心、肝、脾、肺、肾、胃、小肠、脑、肌肉、脂肪、睾丸）5个时间点（2、6、10、12、24h），进行了组织器官的分布研究。环维黄杨星D分布广泛，除脑、睾丸、脂肪中浓度较低外，大部分组织中均有较大分布。其中在肝脏内分布量最大，其次为脾脏、肾脏和心脏。在肝脏中发现多个代谢产物，表明该药物可通过肝脏代谢。脑组织中能测到原型药物，说明环维黄杨星D能透过血脑屏障，向脑组织内分布。 大鼠ig 给药环维黄杨星D 10 mg·kg-1后，不同的时间收集的尿液、粪便、胆汁中均能检测出环维黄杨星D。以粪便中的排泄量较大，72h内粪便中原形药累计排泄量为36%；尿液中 72h原形药累计排泄量为0.66%；。胆汁中24h原形药累计排泄量占给药量的0.21%。 关键词：环维黄杨星D；HPLC-MS；大鼠；吸收、分布、排泄 环维黄杨星D (cyclovirobuxine D，简称CVB-D) 是从黄杨科植物中国小叶黄杨Buxus microphylla Sieb.et Zucc.var.sinica Rehd. et willa及其同属植物中提取而得到的生物碱，现收载于《中国药典》2000年版一部。它具有行气活血，通络止血之功效。临床上主要用于气滞血瘀所致的胸痹心痛，脉结代；冠心病、心律失常患者常见上述证候者。本文按一类中药新药的要求，对血浆样本测定方法建立的基础上对环维黄杨星D在大鼠体内的吸收、分布、排泄的过程进行了系统研究，为环维黄杨星D及制剂的临床应用提供了科学的依据。 实　验　部　分 1　材料与仪器 1.1 药品与试剂：环维黄杨星D灌胃给药样品（南京小营制药厂提供，经HPLC法检测含量98.5%，经HPLC-MS检测纯度为99%）。甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂为分析纯。硅胶（柱层析用，100-200目）青岛海洋化工厂生产。 1.2 动物：Sprague-Dawley 大鼠，♂,体重180～220g，由南京中医药大学实验动物中心提供,动物许可证：SYXK（苏）2002-0053。 1.3 仪器： LC-DAD-ESI-TOF联用系统：Waters 2690 液相色谱仪，Waters 996二极管阵列检测器（美国Waters公司）；MarinerTM 5140质谱仪（美国 Applied Biosystem公司）：电喷雾离子化接口飞行时间质谱检测器。质谱工作站：MarinerTM工作站（4.0 版）。T25 Basic Ultra turrax组织匀浆粉碎机（JKIKF公司，MALAYSIA制造）；GS-15R冷冻离心机（美国Beckman公司制造）。 2　方法与结果 2.1 给药方案及样品的采集 2.1.1 血浆样品的采集 Sprague-Dawley大鼠216只，随机分为3组，每组雌雄各半，ig 给药，实验5、10、20 mg·kg-1 3个剂量组。于给药0.5