抗菌药物敏感性试验(药敏试验)教学内容.ppt

抗菌药物敏感性试验（药敏试验）;内 容;药敏试验原理;;;MIC的对数与抑菌环直径关系 ——近似线性负相关;CLSI药物选择原则;表中小框内是一组类似药物，其结果解释和临床效力相似，不必个个试验。 “或”字表示一群相关药物，其抗菌谱和解释结果几乎完全相同，交叉耐药性和交叉敏感性也完全相同，通常只选择一种药进行试验。;;青霉素G;磺胺异恶唑;B组药物;C组药物;试验方法—纸片扩散法; 培养基 非苛氧菌用Mueller- Hinton（M-H）琼脂 药物纸片 直径6mm纸片，每片吸水量约20μl 菌液比浊管 0.5号麦氏（McFarland）标准比浊管， 菌液浓度为1.5×108/ml 质控菌株 金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 大肠埃希菌 ATCC 25922 铜绿假单胞菌 ATCC 27853;;菌液制备 挑取已纯化的4~5个菌落制备菌悬液 挑选琼脂平板上3~5个形态特征一致的菌落，用接种环接触每个菌落顶部 转移至4~5mL 适宜的液体培养基中（如胰酶消化大豆胨肉汤）;; 从孵育16-24h 的非选择性琼脂培养基上用接种环挑取单个新鲜菌落，悬浮于生理盐水或肉汤中震荡混匀 与标准比浊管比浊，以有黑字的白纸为背景调整其浊度相当于0.5号麦氏管。;;用无菌棉拭子蘸取菌液 在管壁上方旋转挤压几次去掉过多水分 用拭子涂布整个M-H培养基表面，反复几次，每次将平板旋转60° 最后沿平皿周边绕两圈以保证涂布均匀;; 将接种好的平板敞开盖子倒置在室温下干燥3-5min 使平板上的水分被琼脂完全吸收。 用镊子取纸片一张贴在琼脂平板表面，轻压使其与琼脂完全接触。纸片中心间距≥24mm,纸片中心距平皿边缘≥15mm。直径90mm的平板最好贴6张。;15min内将平板倒置放温箱孵育。;;;;可用直尺或游标卡尺，读取最接近的整毫米数 测量时应将尺子置于倒置的平板上，置平板在黑色无反射光背景上方几厘米处并用反射光照明。 含血的药敏琼脂 应移去平板盖后用反射光照明平板，于表面上方测量抑菌环。;测量抑菌环直径时 抑菌环边缘以见不到细菌明显生长为限，测量的是完全抑制的区域直径（包括纸片直径） 按抑菌环直径判断细菌的敏感性，应依据CLSI的解释标准，报告细菌对测试药物敏感、中介、耐药。;;;;;报告方式;;;;;;沙门菌属的肠道外分离株应测试并报告氯霉素和一种三代头孢菌素的敏感性 肠球菌对头孢菌素类、氨基糖甙类、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶和克林霉素在体外可能有活性但临床耐药，不能报告敏感。;MRS应报告耐受所有β-内酰胺类药物（包括其复合药） 从威胁生命的感染（脑膜炎、菌血症、会厌炎和面部蜂窝组织炎）患者的血和脑脊液中分离的流感嗜血杆菌常规应报告氨苄西林、一种三代头孢菌素和氯霉素的药敏结果。;“警 告” 下列抗生素/微生物组合，在体外可出现活性;苛养菌药敏试验;;HTM;HTM;淋病奈瑟菌;;;适用于肠杆菌科细菌等快速生长的致病菌 无论哪种接种方式，只要质控菌种的抑菌环在预期范围内，均可按同一解释标准报告药敏结果 为WHO推荐药敏方法 专性厌氧菌及酵母样菌等某些特殊菌种药敏试验不能用;技术简单，试剂量低，不需要特殊设备，可自由选择抗菌药物，可重复，易于由人判断，故必须标准化。 纸片法药敏试验必须标准化;影响因素;M-H 培养基;按商用脱水培养基说明制备 高压灭菌后水浴冷却至45-50℃ 水平台面上倾注平皿，厚度均匀一致约4mm，150mm平皿倒 60-70mL，100mm平皿倒 25-30mL;冷却至室温，若当天不使用应贮存于 2-8℃冰箱 制备后7天内使用完毕 每批平板均应进行抽样进行无菌试验，30-35℃孵育24h或更长时间。;检查每批 M-H琼脂的pH，胶化后室温下为7.2-7.4 过低、过高会使某些药物失去效力（如氨基糖甙类和大环内酯类）或活性可能增强（如青霉素类）。;若使用前琼脂表面过分潮湿，应放35℃孵箱或在室温下敞开盖子倒置，直至多余水分蒸发。 琼脂表面应保持湿润 在接种后琼脂表面或平板的盖子表面不应有可见的潮湿水珠;过量胸腺嘧啶核苷或胸腺嘧啶可逆转磺胺类和甲氧苄啶的抑菌效应而使抑菌环变小、模糊甚至消失而导致假耐药的报告，应使用胸腺嘧啶核苷含量尽可能低的M-H琼脂。 评价新的M-H琼脂可用甲氧苄啶/SMZ纸片对粪肠球菌ATCC29212或粪肠球菌ATCC33186进行试验;;主要指镁和钙 影响氨基糖甙类、多粘菌素和四环素对假单胞菌的试验结果 含量过高 抑菌圈变小 含量过低 抑菌圈变大甚至不可接受 锌离子主要影响细菌对碳青霉烯的敏感性;培养条件;纸片的贮存;;使用纸片分配器应上紧盖子并配