微柱凝胶免疫检测技术博迅产品操作03版说课讲解.ppt

3）将待检者血浆各50μl分别加入Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ微管中； 4）37℃孵育15分钟； 待检者血浆 50μl 50μl 50μl l l 50μl 50μl 50μl 5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 6）结果判读。 根据当前使用的筛检红细胞的反应格局来判定 5、抗人球蛋白检测卡—交叉配血试验 操作步骤： 1）将准备好的检测卡做好标记； 2）将供血者0.8%红细胞悬液与受血者血浆各50μl先后加入主侧管中； 受血者血浆 50μl 供血者红细胞悬液 50μl 3）将受血者0.8%红细胞悬液与供血者血浆各50μl先后加入次侧管中； 4）37℃孵育15分钟； 供血者血浆 50μl 受血者红细胞悬液 50μl 5）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 6）结果判读。 例如上图：1、3不配合；2配合 交叉配血实验注意事项 1.应用直接抗人球蛋白微柱凝胶免疫试验检测病人红细胞时，一定要用适量EDTA的试管采血液标本，该标本不能放入2℃-8℃冰箱保存，以避免红细胞在病人体外致敏所致假阳性反应。 2.红细胞标本一定不能被细菌污染，否则出现假阳性反应。尽可能应用当日采集的新鲜血做本试验。如不得不用过夜血或陈旧血，则必须首先用该标本做阴性对照试验，以确定该标本是否可以做本实验。 3.血清标本：血清标本必须充分去纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍阴性红细胞沉淀，呈假阳性反应。 4.如在微柱凝胶管中出现溶血现象，强烈提示为红细胞抗原抗体阳性反应，也不排除其他原因所致溶血，故对此标本一定认真分析，并向上级主管技术人员报告并讨论其原因。 5.每日试验前，先取出微柱凝胶卡放置至室温。 6.红细胞悬液的浓度应为0.8%，不得超过1%。 7.使用低离子液（Liss液）稀释红细胞可增强敏感性。 8.检测卡应放在18-25℃储存，如若长期放在4℃冰箱，建议每1个月取出，用专用离心机离心一次，以防止干胶或产生气泡。 操作步骤： 1）将准备好的检测卡做好标记； 2）将0.8%待检者和阴性对照（健康男性O型）红细胞悬液各50μl分别加入微管中； 1 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 2 3 4 5 0.8%待检者红细胞悬液 阴性对照 6、抗人球蛋白检测卡—抗人球蛋白试验 3）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 4）结果判读。 结果：1、2、3和5阳性 4阴性 7.抗人球蛋白检测卡—母体IgG抗体效价检测 操作步骤 1）在试管中分别加入200μl母体血清和200μl 2-ME应用液，然后置于37℃水浴30-60分钟。以充分破坏血清中IgM类抗体； 200μl母体血清 200μl 2-Me 37℃水浴30-60分钟 2）取6只干净试管，分别做好标记。将处理后的血清做倍比稀释； 32 64 128 256 512 16 350μl 200μl 200μl 200μl 200μl 200μl 标记并加入稀释液 32 64 128 256 16 灭活后的血清 50μl 200μl 200μl 200μl 200μl 200μl 512 3）将准备好的HDN母体IgG抗体效价检测卡做好标记，在所有孔中分别加入50μl父亲（或父亲同型）的0.8%红细胞悬液（ABO血型系统IgG血型抗体）或在所有孔中分别加入50μl标准O型0.8%红细胞悬液（测定孕妇ABO血型系统以外IgG血型抗体）； 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 0.8%红细胞悬液 4）依次将50μl倍比稀释血清分别加入对应孔中； 16 32 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 50μl 64 512 256 128 5）37℃孵育15分钟； 6）离心5分钟（900rpm2分钟，1500rpm3分钟）； 7）结果判读。 结果：效价为 1：128 提示： 将每次采集的血清标本分装冻存，每次检测要以同样的方法、同样的表型抗原红细胞，当次检测的血清要和以前冻存的血清同时对照试验。 HDN母体IgG抗体效价检测实验注意事项 1.血清标本：血清标本必须充分去除纤维蛋白，否则标本中纤维蛋白在微柱凝胶中析出，阻碍红细胞沉淀，呈假阳性反应。 2.父亲红细胞标本也可用与其同型的A型或B型红细胞代替。 3.每