实验三血清红细胞制备讲义.ppt

实验三血清红细胞制备 实验目的 1、学习实验动物不同部位的取无菌采血方法； 2、学习动物血清、红细胞的制备； 3、观察兔、豚鼠的免疫器官。 实验原理 免疫系统由免疫器官、免疫组织、免疫细胞和免疫分子组成。 免疫细胞 1.固有免疫的组成细胞：吞噬细胞、淋巴器官、树突状细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞； 2.适应性免疫应答细胞：T细胞、B细胞 免疫分子 1.膜型分子：TCR、BCR、CD分子、粘附分子、MHC分子、细胞因子受体。 2.分泌型分子：免疫球蛋白、补体、细胞因子。 实验原理 血液是一种结缔组织（细胞间质）。血液系统是各种重要的免疫细胞、免疫分子的载体，也是各种免疫事件发生的场所。 组成：1、血浆 ①血浆蛋白（白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原） ②脂蛋白、无机盐、氧等成分 ③激素、酶、抗体 ④细胞代谢产物等。 2、血细胞 ①红血球、 ②白血球（有粒白细胞：中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞和无粒白细胞：单核细胞和淋巴细胞) ③血小板 实验原理 实验研究中，要采集实验动物的血液进行检查或分析，故必须掌握血液的正确采集、分离和保存的操作技术。 采血方法的选择，主要决定于实验的目的所需血量以及动物种类。 ①用血量较少可刺破组织取毛细血管的血 ②当需血量较多时可作静脉采血 （原则：静脉采血时，若需反复多次，应自远离心脏端开始，以免发生栓塞而影响整条静脉) 实验原理 现将采用血方法按动物和部位分别加以介绍。 小鼠和大鼠采血方法：割尾采血法、尾静脉穿刺采血、眼眶后静脉丛采血、摘眼球法、断头采血、颈（股）动静脉采血 豚鼠采血法：耳缘剪口采血 、心脏采血 、股动脉采血 、背中足静脉取血 兔采血法：耳静脉采血 、耳中央动脉采血 、心脏取血 、后肢胫部皮下静脉取血 、股动静脉、颈动静脉取血 、 鸡采血法 ：翼根静脉采血、心脏采血、颈静脉采血 实验原理 家兔采血方法 （1）耳缘静脉采血： 家兔固定，将耳缘静脉皮肤上的毛拔去或剪去，75%酒精消毒，用左手食指和中指夹住静脉近心端，以使其血管怒张拇指和小指夹住耳缘部分，以左手无名指和小指放在耳下作垫，待静脉充盈后，右手持注射器使针头由静脉末端刺入，顺血管方向向心端刺约1-1.5cm，放松左手拇指和食指对血管的压迫，右手缓慢抽吸注射器，若注射阻力较大，说明针头没有刺入静脉，应调整针头或重新穿刺；也可以刀片在血管上切一小口，让血自然流出，滴入盛器内，采血完毕，用干棉球按压止血。 （2）兔心脏穿刺取血： 家兔背位固定，在左胸第2～4肋间剪毛一块，用75%酒精和碘伏消毒。然后用5～10ml注射器，在胸骨左缘3-4肋间心尖搏动最明显处作垂直穿刺。 注意事项有： ⑴动作宜迅速，以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固； ⑵如针头已进入心脏但抽不出血时，应将针头稍微后退一点。 ⑶在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心，肺、 实验原理 豚鼠采血方法 （1）背中足静脉取血 固定动物，将动物脚背面用酒精消毒，找出背中足静脉后，以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端，右手拿的注射针刺入静脉。采血后，用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时，两后肢交替使用。 （2）心脏采血 通常在胸骨左缘的正中，选心跳最强的部位作穿刺。针头宜稍细长些，以免发生手术后穿刺孔出血，其操作手法详见兔心脏采血。 实验动物的采血量 动物种类 最大安全采血量（ml） 最大致死采血量（ml） 小白鼠 0.1 0.3 大白鼠 1 2 豚鼠 5 10 家兔 10 40 狗 50 300 猴 15 60 血清的制备 血清的制备：不加抗凝剂 无菌静脉采血2ml，37℃自然凝固，待血清开始出现后，放冰箱内12小时或24小时，离心分离血清（3000rpm，5-10min），得到的上清液即为血清，小心将上清吸出（注意切勿吸出细胞成分）。 血浆的制备：需加抗凝剂（抗凝剂：血液 = 1：9） 无菌静脉采血2ml（注射器用抗凝剂润洗），将血液加入到有抗凝剂的离心管中颠倒混匀，离心（3000rpm，5-10min）后所得的上清液即为血浆。 注意：血清的保存可以在每50ml血清中加1％硫柳汞水溶液1ml防腐。