输血科试验操作规程.doc

输血科试验操作规程 一、血型血清学检查的操作规程 （一） ABO+RH血型鉴定常规方法 1..试剂： 单克隆或多克隆抗A、抗B试剂，RhD(IgM)血型单克隆抗体定型试剂，2-5%的反定红细胞悬液 2.．操作步骤： （1）将病人标本离心 （2）反定型：取两只试管分别标明A、B，加入相应的反定细胞各1滴，加入病人的血浆1滴，离心 （3）将玻片用红蜡笔划分为3个区域，各加一滴待测标本红细胞，分别滴加抗A、抗B、RhD试剂，轻轻晃动观察结果 （4）结果：有凝集为阳性。无凝集无溶血为阴性。正反定型对照得出结果 （二）ABO+RH血型鉴定（卡氏法）操作 1.试剂：Ortho Biovue ABO-Rh正反定型血型试剂卡友6个微柱组成，每一柱中含有缓冲液，其成分为牛血清蛋白、大分子增强剂以及0.1%叠氮钠和0.01M的EDTA。 2.操作步骤： （1）配置0.8%的反定细胞（一般配成约1.5%） （2）将试剂卡编号，并打开试剂卡 （3）将病人血标本离心 （4）将50ul的反定细胞A、B加入到相应反应腔中（5号6号柱），加入50ul的病人血清。 （5）取50ul的病人压积红细胞加入1ml的盐水中配成5%的红细胞悬液，分别加入前四柱10ul的5%红细胞悬液。 （6）离心，读取结果. 按照下表并结正反定型对照。得出结果 报告 试验结果 阴性 无溶血及红细胞未凝集 1+ 大部分凝集的红细胞停留在玻璃珠柱床的下半部分，柱的底部有一些红细胞 2+ 发生凝集的红细胞分布于整个玻璃珠床，柱的底部有少量的细胞 3+ 发生凝集的大部分红细胞玻璃珠床的上半部分 4+ 红细胞在柱中玻璃珠的上面凝集，并形成一个环形带 （二）改良凝聚胺技术交叉配血试验 主要组成成份：R1：低离子介质、R2：凝聚胺、R3：假凝集清除液。 步骤： 复检供血者、受血者血型 主侧管加入供血者3%-4%的红细胞悬液1滴，加入受血者血清1滴或2滴 次侧管加入受血者3%-4%的红细胞悬液1滴，加入供血者血清1滴或2滴 加低离子介质3滴，混匀，静置30秒，各管加凝聚胺1滴，混匀，3500r/min离心15秒，倒出上清液（残留约0.1ml）,扣摇，肉眼可见明显的凝集状（如无凝集须重做），加假凝集清除液1滴于管底，轻摇，凝集1min内消失呈均匀混悬液，为阴性，凝集1min内不能被消除，即为阳性。 三.结论：阳性表示受（供）血者红细胞血型抗原相应的抗体（IgG或IgM）不相容，阴性表示供受血者相容。 （三）卡式交叉配血试验 一、工作准备： 1.生理盐水 2.0.8%-1%样本红细胞配备：10ul样本压积红细胞加入1ml的生理盐水中 二.操作步骤： 1.1号管中（主侧）加入50ul供血者1%红细胞悬液，25ul受血者血浆或血清。 2.2号管中（次侧）加入50ul受血者1%红细胞悬液，25ul供血者血浆或血清。 3.37℃孵育15min 4.离心5min，判断结果，记录 注：1+至4+为抗人球配血不成功，-（0）为配血成功 (四）抗体效价测定操作规程 操作步骤： 一．IgG类 1、IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200ul加等体积2－Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200μl病人血清＋600μl生理盐水备用 排列6支试管按顺序编号。第二管开始加样枪各加加生理盐水200，在第一管和第二管中各加入稀释血清200μl，第二管混匀后移出200μl转至第3管，以同样操作稀释至第6管，从第6管吸出200μl暂时保留在另一试管中（可作为第7管），以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第6管的血清稀释度依次是1∶8，1∶16，1：32，1：64，1：128，1：256； 2、加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂） 每管各加2%相应红细胞悬液200μl，混匀。（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液； 3.先直接离心观察结果，之后再每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30 S均匀后，再各加R2溶液1滴，并混合均匀，离心后再加R3液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。 二． IGM 1、 血清连续倍量稀释法 先稀释血清：100μl病人血清＋700μl生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加加生理盐水200ul，从第一管和第二管中各加入稀释血清200μl，第二管混匀后移出200μl转至第3管，以同样操作稀释至第6管，从第6管吸出200μl暂时保留在另一试管中（可作为