guan-3动物细胞培养.ppt

收获细胞 一个问题：怎样实现接种传代培养？？ 球传球技术 （5）应用举例 生物反应器培养非洲绿猴肾细胞vero和狂犬病毒 1 材料与方法 （1）细胞：非洲绿猴肾细胞Vero细胞(ATCC): 150-180代。 （2）培养基：DMEM(Dulbecco Modified Eagle Medium GIBCOL)，5%～10%小牛血清和硫酸庆大 霉素，用碳酸氢钠或盐酸调至pH7.2。 （3）?微载体：CT-3微载体 （4）反应器：5LCellGen细胞培养反应器 (NBS.CO.U.S.A.)，50LCellCul- 50A细胞培养生物反应器 2 培养过程 以CelliGen5L细胞培养反应器作为种子罐培养，当细胞生长到一定密度时，将细胞和新的微载体一起移入CellCul-50A细胞培养反应器中 。自动控制：温度37±0.1℃、溶解氧为50%空气饱和度、转速为20～32rpm。 细胞培养到一定密度后，接种狂犬病毒。第2天停止搅拌，抽出培养基，加病毒培养基继续培养。病毒培养条件为pH7.4～pH7.8、溶解氧为40%～60%空气饱和度、温度为37.0℃。 3 培养结果 培养8天，细胞密度达1.1×107cells/ml。细胞贴附在微载体上生长的电镜照片见图。在整个培养过程中细胞形态饱满光滑、长较快，细胞在较短的时间内达到高密度，且可多层生长。接种病毒后10天，能产生较高的病毒量。 六 动物细胞体外培养 现状与展望 存在的问题 （一）??细胞密度低，产物浓度低。 （二）?细胞群体在大规模、长时间培养过程中分 泌产物能力易丢失，或产物活性易降低。 （三）?动物细胞培养基、培养设备以及培养用微 载体很昂贵。因此大多仅能在小规模范 围内研究，难以转化为生产力。 （四）?目前对细胞代谢和生长动力学的研究比较 欠缺。 （五）在线监测水平技术不完善，限制了优良培 养系统的开发。 今后应重点开展的工作 （一）??细胞培养过程代谢和产物形成机制等方面 的理论研究。 （二）?开发能高密度生长、大量分泌目标产品的 细胞系。 （三） 开发细胞生长性能优良、细胞解离容易， 并能重复使用的新型廉价的微载体。 （四） 研制高效的培养模式与系统，包括新型的 无菌生物反应器培养系统与工艺、先进的 在线检测、分析与自动控制技术等。 （五）相关基因工程与细胞培养技术结合的技术研 究。 思考题 1 原代培养取材时应注意的问题，有哪些培养方法？各自适应范围是什麽？ 2 贴壁细胞传代采用什麽方法？其技术关键是什麽？ 3 大规模细胞培养有哪些操作模式？各有哪些优缺点？你认为如何来改进和发展？ * * 细胞系 原代培养物经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。 如果不能继续传代或传代数有限，可称为有限细胞系。 细胞株 通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养物，称为细胞株。 如果其不能继续传代或传代次数有限，可称为有限细胞株；如果可以连续传代则称为连续细胞株 细胞系 原代培养物经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。 如果不能继续传代或传代数有限，可称为有限细胞系。 细胞株 通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的具有特殊性质或标志的培养物，称为细胞株。 如果其不能继续传代或传代次数有限，可称为有限细胞株；如果可以连续传代则称为连续细胞株 * 1907年，美国胚胎学家R. Harrison将蛙的胚神经管区的一片组织移植到蛙的淋巴液 凝块中，这片组织在体外不但存活了若干星期，而且还从细胞中长出了轴突(神经纤维) 细胞，解决了当时关于轴突起源的争论，并表明了利用体外存活的组织进行实验研究的 可能性。他所采用的把培养物放在盖玻片上并置于凹玻片腔中培养的方法还一直沿用至 * * 分为以下几个时期 游离期：细胞接种后在培养液中呈悬浮 状态．也称悬浮期。此时细胞质回缩，胞体呈圆球形。10分钟一4小时 贴壁期：细胞附着于底物上，游离期 结束。细胞株平均在10分钟一4小时贴壁。底物：胶原、玻璃、塑料、其它细胞等。血清中有促使细胞贴壁的冷析球蛋白和纤粘素、胶原等糖蛋白（生长基质），这些带正电荷的糖蛋白的促贴壁因子先吸附于底