课题DNA的粗提取与鉴定-公开课件（讲义）.pptVIP

* 复习巩固: (1)如何观察DNA和RNA在真核细胞中的分布情况? (2)真核细胞DNA的主要存在场所? (3)证明DNA是遗传物质的三个经典实验? (4)DNA分子双螺旋结构模型的提出者是谁? (5)DNA分子双螺旋结构模型的主要特点? 1、DNA分子由两条链组成,这两条链按反向平行的方式盘旋成双螺旋结构. 2、DNA分子中的磷酸和脱氧核糖交替连接.排列在外侧,构成基本骨架,碱基排列在内侧. 3、DNA分子两条链上的碱基通过氢键连接成碱基对. 1、你所知道的生物大分子有哪些? 2、如何来提取生物大分子? 3、提取DNA的基本思路是什么? 4、可以将DNA溶解于水和其他物质分离开来的方法吗? 学生活动1: 一、基础知识 ①根据DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图，思考在什么浓度下，DNA的溶解度最小？ DNA在NaCl溶液中的溶解度是如何变化的？ DNA在NaCl溶液中的溶解度曲线图 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14 mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大。 ②如何通过控制NaCl溶液的浓度使DNA在盐溶液中溶解或析出？ 当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L时，DNA的溶解度最大，浓度为 0．14 mol／L时，DNA的溶解度最低。利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 1、DNA能溶于酒精溶液吗？ 2、细胞中的其它物质呢？ 3、由此你想到了什么? 4、DNA对酶、高温和洗 涤剂的耐受性? 学生活动2: 二、实验方法及注意事项 （一）实验材料的选取 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 学生活动3: 1、怎样使鸡血细胞破裂？原理是什么？ 2、如果实验材料是植物细胞又该如何处理？ 3、加洗涤剂和食盐的作用是什么？ 4、提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加 入一定的洗涤剂和食盐，进行从分的 搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ （三）去除滤液中的杂质 探究活动4: 1、此步骤获得的滤液中可能含有哪些细胞成分？ 2、为了纯化提取的DNA需要将滤液作怎样的进一步处理？ 3、为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 4、方案二和方案三的原理有什么不同？ （四） DNA的析出与鉴定 学生活动4: 3、如何鉴定DNA分子？应注意什么？根据你前面所学的知识，还可以用什么物质来鉴定？ 2、纯的DNA应该是什么颜色？ 1、怎样使鸡血细胞破裂？原理是什么？ 1.制鸡血细胞液（活鸡鲜血经分离或沉淀获得） 0.1g/mL柠檬酸钠100mL 活鸡鲜血180mL 500mL烧杯中，玻棒搅拌，离心、分离或静置沉淀。 2.提取DNA。 ①取血细胞5-10mL＋20mL蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌。 ②纱布过滤：滤液中含DNA和其他核物质，如蛋白质。 ⑴.提取血细胞核物质： ⑵.溶解核内的DNA： 滤液＋2mol/L的NaCl溶液40mL，玻棒沿一个方向轻缓搅拌。 三、实验步骤 ⑶.析出含DNA的粘稠物： ⑷.滤取含DNA的粘稠物： ⑸. DNA粘稠物的再溶解： 在上述溶液中缓缓加入蒸馏水，并沿一个方向轻轻搅拌，出现丝状物；当丝状物不在增加时，停止加水（此时NaCl溶液的浓度相当于0.14mol/L）。 用多层纱布过滤，含DNA的粘稠物留在纱布上。 20mL2mol/L的NaCl溶液 步骤⑷含DNA的粘稠物 在20mL烧杯中轻缓搅拌3min，使尽可能多的DNA溶解在NaCl溶液。 ⑹.过滤含有DNA的NaCl溶液： 用放有两层纱布的漏斗过滤步骤⑸所得的溶液，滤液中含有DNA。 ⑺.提取含有杂质较少的DNA： 步骤⑹所得的滤液＋体积分数为95%的冷却酒精50mL，用玻棒沿一个方向轻缓搅拌，溶液中（析出）出现乳白色丝状物，用玻棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。 3.DNA的鉴定： 加入二苯胺试剂4mL，用玻棒搅拌使DNA溶解，沸水浴5min，观察溶液是否出现浅蓝色。 1.共有“三次过滤，两次析出，七次搅拌” 2.加入“两次蒸馏水，三次NaCl溶液，一次酒精” 三、实验小结 四、实验原理拓展介绍。 1.DNA的释放。 DNA主要在鸡血细胞的细胞核内，正常情况下不会释放出来，蒸馏水对于鸡血细胞是一种低渗液，水分可以大量进入血细胞，使之胀破，同时加上玻璃棒快速搅拌的机械作用，加速血细胞的细胞膜和核膜的破裂。但释放出来的大量DNA与RNA、蛋白质结合在一起，即释放的不是纯净的DNA，常称为DNA核蛋白。 2.DNA与蛋白质分离。 在高浓度（2mol/L）的氯化钠溶液中，核蛋白易溶解，析出DNA并溶解在高浓度的氯化钠溶液中 3.DNA的析出与获取。 因为DNA在低浓度（ 0.14