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第
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谷蛋白亚基的粗提法
取一粒种子，横向切下尾部的1/3，用1/4的称量纸包好杂碎成粉，计算面粉重量，带有胚的部分在鉴定后发芽播种繁殖。
胚乳部分砸碎后置于1.5ml离心管中，按25μl /mg的比例加入提取液。沸水中煮8-10 min，冷却后13000rpm离心7min。
胶的用量：
分离胶：20×20cm，1.0mm厚的梳子，30ml/板，10×10cm，1.0mm厚的梳子，7.5ml/板。室温下凝40-50分钟。
浓缩胶：20×20cm，1.0mm厚的梳子，7.5ml/板，10×10cm，1.0mm厚的梳子，2.5ml/板。室温下凝1小时左右。
电泳：大板（20×20cm）：100V稳压跑16-18h。小板（10×10cm）：80V稳压跑13h，或80V跑1小时，200V跑4小时。
染色：染色过夜（急着看结果的话染4-5小时也可以）。
脱色：7 % 乙酸和10 % 甲醇的混合液（500ml：35ml乙酸、50ml甲醇、415ml水）。条带清楚即可。
漂洗：去离子水漂洗2次。
提取液的配方：
2. 5 ml 0. 5 M Tris-HC1 (pH6.8)
100 mg DTT
400 mg SDS
2 ml glycerol
3 mg 溴酚蓝或Y Pyronin(指示剂)
混合后，加蒸馏水至10ml。
10×电极缓冲液（1000 ml）：144 g 甘氨酸，30 g Tris-base，10 g SDS。
染色液：
0.1%R-250，45%乙醇，10%的冰乙酸（先用乙醇溶考马斯亮蓝）。
SDS：
采用不连续SDS分离系统。分离胶浓度为15%，浓缩胶浓度为5%。5-7μl上样。
15%下层胶（分离胶）
上层胶（浓缩胶）
10ml
30ml
40ml
60ml
5ml
10ml
20ml
30ml
30%胶（29.61：0.39）
5.0ml
15ml
20.0ml
30ml
30%胶（29.61：0.39）
0.835ml
1.67ml
3.3ml
5ml
水
2.35ml
7.05ml
9.4ml
14.1ml
水
2.9ml
5.8ml
11.6ml
17.4ml
1.5M Tris-HCl (pH8.8)
2.5ml
7.5ml
10ml
15ml
0.5MTris-HCl(pH6.8)
1.25ml
2.5ml
5ml
7.5ml
10% SDS
100μl
300μl
400μl
600μl
10% SDS
50μl
100μl
200μl
300μl
10 ×APS
50μl
150μl
200μl
300μl
10 ×APS
25μl
50μl
100μl
150μl
TEMED
5μl
15μl
20μl
30μl
TEMED
5μl
10μl
20μl
30μl
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