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中国林业科学研究院
文档上传人联系方式：1019701869@ 木本植物石蜡切片制作流程（使用于木质化较高的样品）
1.前期准备实际准备：
FAA 固定液（100 ml）：（固定木质化程度较高的植物材料加甘油）
10% 甲醛 10ml
5% 乙酸 5ml
10% 甘油 10ml
50% 乙醇 50ml
水 25ml
2. 透明：随后经酒精与叔丁醇梯度脱水透明，逐级脱水至100%叔丁醇，每级2 hr。
叔丁醇系列脱水剂：
项目
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
Ⅳ
Ⅴ(
Ⅵ
ddH2O
40
30
15
0
0
0
95%乙醇
50
50
50
50
25
0
叔丁醇
10
20
35
50
75
100
时间
1h
1.5h
2h
2h
2h
2h+2h
（加番红目的是包埋时便于区分材料方向）
3. 浸蜡：在样品/叔丁醇中加入等体积融化的石蜡中。60℃-65℃中，放置24 hr以上，其间用纯石蜡替代4 次以上。
4. 包埋：将样品连同融化的纯石蜡倒入纸盒内，用解剖针将材料按一定的方向摆好，待蜡块稍凝固，立即放入常温水中，使其快速硬化。
5. 切片：修蜡块，粘于木块上，用切片机切出8μm 厚度的切片，粘片后，在45℃
6. 脱蜡：切片依次经过2次二甲苯→1/2二甲苯+1/2无水乙醇→2次无水乙醇→85%乙醇→95%乙醇→70%乙醇→50%乙醇→30%乙醇→蒸馏水。每级5min(GUS染色材料前两步
7. 染色：TBO染色（最好滴染，容易掌握染色时间），染色时间视TBO浓度及切片材料不同而有所差别。
注：根据观察不同的部位，如观察木质素可采用组织化学染色：
a: Wiesner 反应：2%间苯三酚酒精溶液浸泡 5min,滴加 6mol/L 盐酸，封片，暗场光观察拍照；
b: Maule 反应：1%高锰酸钾浸泡 5min，蒸馏水洗 3 次，3%盐酸浸泡1min,蒸馏水冲洗，滴加29%浓氨水封片，明场光观察拍照。
8. 镜检：封片，显微镜观察拍照。
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