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维普资讯 ff～ Ib 第14卷第1期 中 国 病 毒 学 V0l14 No 1 1999年 3月 V1ROL0GICA SINICA M ar l999 1O株水痘带状疱疹病毒的分离鉴定与生物学特性 郑官增 叶冬桂 朱智荨 R ； ’ (‘浙江省台州市卫生防疫站 ．浙江台州 317000) 皮}7上 ‘ (浙江省 台州医院，浙江 台州 317000) (浙江省卫生防疫站，杭州 310009) 摘 要 用 VetoE6细胞从 12倒水痘及带状疱疹病^水疱液 中分离到 l0株病毒，分离阳性率为 833％。10株病毒均具有使感染细胞圆缩 、融合、脱落等典型 的 vzv 局灶性细胞病变 (CPE)特 点，CPE随着传代次数增加而加快 用带状疤疹恢复期病^血清作 闻接免疫荧光染色镜检，可见 典型的感染细胞核 内荧光块 。1O株病毒感染细胞制成的抗原片．检测 5倒带状疱疹病^急性期及 恢复期血清。荧光抗体滴度均有 4倍 以上增高。Vzv对 Vero细胞敏感 ；对沙 鼠肾，胎兔 肾．胎豚 鼠 肾、肺 、脾原代单层细胞不敏感 ；对乳小 白鼠不敏感。毒种在 一20℃保存一周 内死亡 ；但在 30％脱 脂牛奶 、20％小牛血清及 10％山梨醇 Eagle’s液 中，蔽体或真空冷冻干燥 一100℃可保存二年 上。 关键词 水痘带状痘疹病毒．分离，鉴定，生物学特性 ’●， … 。。 一 水痘带状疱疹病毒 (VZV)是 引起人类水痘 、带状疱疹的病原 。为 了寻找水痘带状疱疹疫 苗病毒株及研制疫苗的基质细胞，我们 自1994年 以来，用Vero—E6细胞床边接种法，从 2例水 痘和 l0例带状疱疹病人水疱液中分离到 lO株 VZV，并对其生物学特性作了初步探索研究。 现报告如下 ： 1 材料与方法 11 标本 12例标本均用无菌注射器吸取病 ^出疱后 2～10d的水疱渡 ．立 即送病毒实验室接种 12 细胞 Vero．E6及 Veto传代细胞 由朱智勇教授提供 ；2BS和 HLF二倍体细胞分别来 自中国药 品生物制 品检定所和中科院上海细胞所，本室传代保存 ；沙鼠肾，胎兔肾．胎豚鼠肾、肺、脾原代细胞均本室 自制 生长 浪为 1O％新生小牛血清Eagle’s液。 13 病毒分离… 生长成单层的Veto—E 细胞倒去生长液．每 5mL小方瓶单层细胞接种标本 0l～05mL (视标本量而定)，36℃吸附2h后．倒去标本液．用 Eagle’s液洗一次．加 5mL维持液，置 36℃温箱每 日观察 CPE。每 隔2～3d揍液一次．7d后如无CPE出现则进行盲传，盲传 3次仍无CPE则视为分离 阴性。 14 带状疱疹病人急性期及恢复期双份血清 急性期血清采 自病^出疱第1～2天，恢复期血清采 自出疱后 l0～14d皮损结痂大部分脱落的病人血清。 15 间接免疫荧光测定 “ 出现CPE后的细胞，用002％EDTA+01％胰酶消化液分散细胞．取小量细胞 悬液滴在玻片上干燥，玲丙酮 固定 l0min后，1：20稀释带状疱疹恢复期病^血清 37℃结合 45mln，洗涤、峨 干后加甘油封片．用荧光显微镜观察细胞核内荧光染色情况。 1．6 CPE观察 接种标本 后，每 天观察对照细胞有无 自然脱落等非特 异性细胞死亡现 象及 VZV特 异性 牧稿 日期 ：1997—10—2-4．修 回 日期 ：1998—06—24 维普资讯 中 国 病 毒 学 第 14卷 CPE。 “+ 示 CPE在 25％ 下，“+示 CP