研究生-分子生物学Ⅱ笔记整理版.docVIP

分子生物学Ⅱ 专题一 细胞通讯与细胞信号转导 （一）名词解释 （1）信号分子(signal molecule)：是指在细胞间或细胞内进行信息传递的化学物质。 （2）受体（receptor）：是指细胞中能识别信息分子，并与之特异结合、引起相应生物效应的蛋白质。 （3）蛋白激酶（protein kinase）：是指使蛋白质磷酸化的酶。 （二）简答分析 （1）细胞通讯的方式及每种作用方式的特点。 答： 细胞通讯方式 细胞间隙连接 膜表面分子 接触通讯 化学通讯 各类方式特点 ①两个相邻的细胞 以连接子相联系;②细胞间的直接 通讯方式。 ①细胞通过其表面信号分子（受体）与另一细胞表面的信号分子（配体）选择性地互作，最终产生细胞应答； ②细胞间的直接 通讯方式。 ①细胞分泌一些化学物质（如激素）至细胞外，作为信号分子作用于靶细胞，调节其功能； ②细胞间的间接接通讯 方式； ③包括内分泌，旁分泌和自分泌三种形式。 （2）膜受体介导的信息传递途径的基本规律。 答：配体 → 膜受体→第二信使→效应蛋白→效应。 （3）试以肾上腺素、干扰素、胰岛素、心纳素为例，阐述其信息转导过程。 答：①肾上腺素：cAMP-PKA途径； 过程：首先肾上腺素与其受体结合，使G蛋白被激活；然后G蛋白与膜上的腺苷酸环化酶相互作用，后者将ATP转化为cAMP；最后cAMP磷酸化PKA，从而产生一系列生物学效应。 ②胰岛素：受体型TPK途径； 过程：胰岛素与其靶细胞上的受体结合后，可使其受体中的TPK激活，随后通过下游的Ras途径继续传递信号，直至发生相应的生物学效应。 ③干扰素：Jak-STAT途径； 过程：首先干扰素与受体结合导致受体二聚化，然后受体使JAK（细胞内TPK）激活，接着JAK将下游的STAT磷酸化形成二聚体，暴露出入核信号，最后STAT进入核内，调节基因表达，产生生物学效应。 ④心钠素：cGMP-PKG途径； 过程：心钠素与其受体结合，由于该受体属于GC型酶偶联受体，具有鸟苷酸环化酶的的活性，因此结合后可直接将GTP转化为cGMP，进而激活下游的PKG，最终产生一系列的生物学效应。 （4）类固醇激素是如何调控基因表达的？ 答：类固醇激素穿膜后与细胞内（或核内）受体结合，使受体变构形成激素受体活性复合物并进入细胞核中，然后以TF的形式作用于特异的DNA序列，从而调控基因表达。 专题二 基因分析的策略 名词解释 （1）分子杂交（molecular hybridization）：是指具有一定同源序列的两条核酸单链（DNA或RNA）在一定条件下，按碱基互补配对原则经退火处理，形成异质双链的过程。 （2）核酸分子杂交技术：是指采用杂交的手段（方式），用一已知序列的DNA或RNA片段（探针）来测检样品中未知核苷酸顺序。 （3）探针（Probe）：是指用来检测某特定核苷酸序列的标记DNA或RNA片段。 （4）增色效应：是指DNA变性时260nm紫外吸收值增加的现象。 （5）解链温度（Tm）：是指加热DNA溶液，使其对260nm紫外光的吸光度达到其最大值一半时的温度，即50%DNA分子发生变性的温度。 （6）转基因：是指是借助基因工程将确定的外源基因导入动植物的染色体上，使其发生整合并遗传的过程。 （7）生物信息学：是指利用现代计算机技术对这些原始数据进行收集、整理、管理以便于检索使用。 （二）简答分析 （1）对一个已知基因的进行基因分析的策略？ 答： 在染色体上的位置：FISH 拷贝数的变化：Southern Blot 已知基因 RNA的表达：Northern Blot, qRT-PCR 基因表达 蛋白质的表达：SDS, 2D, IHC, Western Blot, 免疫荧光等（2）对一个未知基因的进行基因分析的策略？ 答： 基因的组成：序列测定 未知基因 在染色体上的位置：FISH 拷贝数的变化：Southern Blot （3）基因表达分析应从哪些方面考虑，可采用什么技术？ 答： 考虑方面 分析内容 相关技术 RNA 表达水平 Northern Blot ；PT-PCR 差异表达 DD-PCR；SSH；DNA微阵列技术 蛋白质 表达水平 SDS;双向电泳;Western Blot 差异表达 双向电泳 + Western Blot；DIGE 定位分析 免疫组织化学；免疫荧光技术