毕业设计（论文）《玫瑰花黄酮类化合物的提取、分离》.docVIP

玫瑰花黄酮类化合物的提取、分离 摘要 玫瑰花中含有丰富的黄酮类化合物。玫瑰花中的黄酮类化合物具有一定的抗氧化能力，采用大孔树脂，硅胶柱层析分离技术对玫瑰花抗氧化活性部位进行分离纯化，并通过色谱和质谱分析，分离鉴定出2种抗氧化活性成分化合物I和化合物II，分别是3，5，7，3，5’五羟基黄酮(槲皮素)和3，4，5-三羟基苯甲酸(没食子酸)。化合物I和化合物II抑制小鼠红细胞溶血活性和抗小鼠组织匀浆脂质过氧化活性均高于玫瑰花粗品，而且都有降低正常小鼠餐后血糖的作用，玫瑰花中的活性成分不仅是一种强抗氧化剂，还有望作为降糖药物进行开发。 黄酮类化合物是在植物中分布非常广泛的一类天然产物[1]，其在植物体内大多与糖结合成苷类存在，小部分以游离态(苷元)的形式存在。绝大多数的植物体内都含有黄酮类化合物，黄酮类化合物在植物的生长、发育、开花、结果以及防病防菌等方面起着重要的作用。 黄酮类化合物不仅分布广泛，种类繁多，而且具有多种生物活性，不同的成分可能具有不同的生物活性与不同的药效作用。 1黄酮类化合物的结构 黄酮类化合物是在植物中分布非常广泛的一类天然产物[2]，其在植物体内大多与糖结合成苷类存在，小部分以游离态(苷元)的形式存在。绝大多数的植物体内都含有黄酮类化合物，黄酮类化合物在植物的生长、发育、开花、结果以及防病防菌等方面起着重要的作用。 早期黄酮类化合物主要是指基本母核为2-苯基色原酮的一类化合物，现在则泛指两个苯环(A环与B环)通过中央三碳相互联结而成的一系列化合物。根据中央三碳的氧化程度、是否成环、B环的联结位置(2-或3-位)等特点[3]，可将该类化合物分成多种结构类型。天然黄酮类化合物多为这些母体结构的衍生物，其常见的取代基有-OH、-OCH3、-OCH20-及异戊烯基、伽啡酰基等。 2玫瑰花黄酮类化合物的提取 工艺流程： 原料预处理→称取→提取提取液→离心分离→取上清液测黄酮含量 首先，建立玫瑰花总黄酮的测定方法，本实验采用分光光度法进行测定[4]。其次，通过乙醇提取和微波辅助提取实验确定玫瑰花黄酮较优的提取工艺。溶剂提取实验选择的研究因素为：提取时间、提取温度、溶剂浓度、料液比；微波辅助提取选择的因素为：提取时间、微波功率、乙醇浓度、料液比、提取温度。溶剂提取和微波辅助提取均先进行单因素实验，在单因素实验的基础上，再进行正交实验，以进一步优化提取的工艺条件。 由于黄酮类化合物在溶剂中的溶解性相差很大，没有一种能适合于所有黄酮类成分的提取溶剂，而必须根据目标成分的性质和杂质的类别来选择溶剂，常用的提取方法有以下几种。采用溶剂提取及微波辅助提取工艺研究确定玫瑰花黄酮类化合物较优的提取工艺，并建立玫瑰花黄酮类化合物的测定方法。 2.1热水提取法 热水提取法常用于各种黄酮苷的提取，提取时将原料投入沸水以破坏酶的活性，提取过程中要考虑加水量、浸泡时间、煎煮时间及次数等。该法设备简单、工艺成本低、安全，适合工业化大生产，但提取的杂质多，收率低，所以并不常用。水浸提银杏黄酮的较优工艺是浸提温度90℃，固液比l：60，重复提取3次，每次1 h。 2.2有机溶剂提取法 乙醇或甲醇是最常用的黄酮类化合物提取的有机溶剂，该方法目前应用广泛，易实现工业化生产。浓度高的醇适用于提取苷元，而浓度在60％左右的适于提取苷类，提取的次数一般为2-4次，可以用渗滤法、回流法和冷浸法，用不同浓度的甲醇、乙醇、乙酸乙酯等有机溶剂对山稔子中的黄酮类化合物进行浸提，然后分别测定浸提液中总黄酮的含量，实验表明，95％甲醇是浸提山稔子中黄酮类化合物的较理想溶剂。 2.3碱性稀醇或碱性水提取法 黄酮类化合物大多具有多个羟基，故可以采取先用碱性液浸提，然后再经过酸化法来获得黄酮类化合物。使用的主要碱性溶液有稀的氢氧化钠和石灰水。这两种碱各有优势，氢氧化钠的浸出能力强，但浸出液杂质多，不利于纯化；石灰水浸出效果不如氢氧化钠的好，但它能沉淀出某些黄酮类化合物而不被浸出[5]。所以一般应根据不同的原料选用不同的碱液。值得注意的是，所选的碱浓度不能过高，以免在强碱性条件下破坏黄酮类化合物的母核，导致其失去活性。工艺流程为取葛根粗粉5009，加饱和Ca(OH)2水溶液(8倍量、6倍量、6倍量)分别提取2、l、O．5h，共3次，合并提取液，调pH值为5，减压浓缩后，浓缩液搅拌下以95％乙醇调醇浓度达65％，静置0．5h，过滤，回收乙醇得总黄酮。 2.4酶法提取 植物提取物中的杂质大多数为淀粉、果胶、蛋白质等，可选用相应的酶利用酶法提取予以分解除去。同时选用恰当的酶，还可以将油溶性的类黄酮转化为易溶于水的糖苷类而利于提取。用果胶酶和纤维素酶对山楂叶中的黄酮进行酶解，然后再用水提取，大大提高了总黄酮的得率，提取率比乙醇提取法提高了16．9％。用酶解法对山楂总黄酮提取，发现通过酶解，