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植物寄生线虫标本制作方法简介 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2006年12月第24卷增刊ChinJParasitolParasitDisDec.2006,Vo1.24,Suppl?S65 文章编号:1000—7423(2006)一Suppl一0065—04 植物寄生线虫标本制作方法简介 段玉玺.陈立杰 【实验技术】 【提要】本文介绍植物寄生线虫的标本制作方法.重点介绍临时玻片标本和永久玻片标本的制作,简要介绍植物寄 生线虫的染色方法.这些方法对植物寄生线虫的分类鉴定和侵染特性研究具有重要意义. 【关键词】植物;寄生线虫;标本制作方法 中图分类号:$432.4文献标识码:A ProcessingMethodsofPlantNematodeSlides DUANYu—xi.CHENLi—jie (PlantNematologyLaboratory,ShenyangAgriculturalUniversity,Shenyang110161,China) 【Abstract】Theprocessingmethodsofplantnematodeslideswereintroducedinthispaper,includingtemporarymounts, permanentmountsandthestainmethodfornematode.Eachmethodwasdescribedstepbystepindetail.Thesemethods wereessentialtothestudyonclassification,identificationandcharacteristicsoftheplantnematode. 【Keywords】Plant;Nematodes;Slideprocessing SupportedbytheNaturalResourcePlatformProjectfromMinistryofScienceandTechnology(No.2005DKA21104) 植物寄生线虫标本制作方法因工作性质,研究目 的和要求的不同而不同.在调查虫口密度及观察一般 形态结构时.常采用临时制片法制作标本.需要进 一 步观察或进行分类鉴定.则需要经过脱水制成永 久玻片标本并长期保存.石蜡切片常用来观察线虫 在植物体内的寄生和危害情况,以及植物组织发生的 病理改变等…1. 1临时玻片标本的制片方法 临时玻片标本的制作方法简单快速.不需要特殊 的仪器设备及药剂.有利于快速鉴定线虫的种类 在制作临时玻片标本时.目前常用的浮载剂是 水,3%甲醛或其他合适的固定剂如三乙醇胺.甲醛固 定液(TAF),甲醛.冰醋酸固定液(FA),甲醛.冰醋 酸.乙醇固定液(FAA)等均可.所用支撑物是5mm 长的细玻璃纤维.最理想的支撑物直径应与所观察的 线虫直径相近,以防止盖玻片压扁虫体.常用封片剂 有亚麻子油.火棉胶等封片剂(Glyceel.英国商品 名),指甲油,中性树胶,阿拉伯树胶或快干搪瓷等. 也有用石蜡凡士林混合剂.该封片剂最早由Don. caster使用,配方为8份石蜡与3份凡士林.65℃下 充分混匀后即可使用.石蜡凡士林混合剂具有固化速 基金项目:科技部自然资源平台项目(No.2005DKA21104) 作者单位:沈阳农业大学植物保护学院植物线虫学研究室.沈阳 llOl6l 度快的优点.从带光源的双目体视显微镜下挑取线虫 需要用挑针.挑针通常有毛针.可用竹签,细的尼龙 丝等制成.也有现成的金属针[. 竹签针的制作方法:截一段长15am,宽2～3am 的竹片,一端用刀削成细的尖头.然后把这尖头在体 视显微镜低倍镜下用刀细心削尖.直至末端尖头仅有 几根纤维 毛针的制作方法:织毛衣的竹针一端.在解剖镜 下小心再削尖,削细.取眉毛一根.竹针尖端沾少许 Zut(亚麻子油.火棉胶等封片剂.美国商品名)封固 剂,将眉毛根部粘在竹针上.眉毛的末端部露出.干 燥后即成 1.1已经杀死与固定的线虫临时玻片标本的制作 A.用吸管汲取一滴浮载剂滴于洁净载玻片标本 中央.液滴要小,使加盖玻片后浮载剂恰好铺满盖 玻片所占的空间.而不溢出太多: B.将固定好的线虫移人浅培养皿中.而后移至 体视显微镜下,用挑针将数条线虫(一般为5～l0 条)逐条挑至载玻片中央的浮载剂中: C.将载玻片置于体视显微镜下观察.用挑针小 心排匀沉于浮载剂底部的线虫: D.选取与线虫虫体直径相似的3根3～5mm左 右的支撑物.均匀置于浮载剂边缘; E.细心将烤热的盖玻片盖于浮载剂上.应避免 产生气泡: . $66.中国寄生虫学与寄生虫病杂志2006年12月第24卷增刊ChinJParasitolParasitDisDec.2006,Vol-24,Suppl F.在体视显微镜下用裁成小