毕业设计（论文）《粒毛盘菌多酚提取及其抗氧化活性的研究》.docVIP

综合实验报告书 （2012~2013学年） 实 验 题 目 粒毛盘菌多酚提取及其抗氧化活性研究 学院名称 生物与食品工程学院 专 业 （班 级） 生物工程10-1班 姓 名 （学 号） 起 讫 日 期 2013年2月25日—2013年3月3日 指 导 教 师 2013年 3 月3日 粒毛盘菌多酚提取及其抗氧化活性的研究 摘要：对粒毛盘菌进行培养，用干燥的菌丝体为原料，采用乙醇浸提和超声波辅助浸提，提取多酚，冷冻干燥后得多酚粗品70mg，并对该样品进行抗氧化，清除超氧阴离子的能力进行实验。结果表明，粒毛盘菌多酚具有很强的还原能力，对O2-·有较好的清除作用。 关键词：粒毛盘菌 ；多酚 ；培养 ；抗氧化活性 Study on extraction technology and antioxidative active of polyphenol produced by Lachnum hyalopus. Abstract: Cultivation of Lachnum,then, extraction of polyphenols in dry mycelia,we get polyphenol of crude 70mg, and study the antioxidant experiment of the sample. The results show that, Lachnum polyphenol has the reduction ability, strong on O2· And DPPH· Free radical scavenging effect is better. Keyword: Lachnum hyalopus；polyphenol ；cultivation ；antioxidative activity 前言：粒毛盘菌属(Lachnum sp.)属于盘菌纲(Discomycetes)柔膜菌目(Helotiales)晶杯菌科(Hyaloscyphaceae)，是广泛分布于世界各地的一类腐生性真菌。据统记，全世界己知粒毛盘菌属大约有170种，中国己知49种，而且新种不断被发现。近两年有学者对粒毛盘菌的生物活性物质进行一些研究，发现其可以产生多酚、多糖等物质，具有抗氧化、抗癌、抗肿瘤、抗辐射、降血压、降血糖等多种生理功能，有望应用于食品添加剂和药品中。因此，粒毛盘菌作为一类生物资源的保护和开发都有着重要的理论与实际价值。本实验通过提取多酚粗品，对多酚的还原能力，对超氧阴离子自由基(O2-·)的清除作用进行研究。 一 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1材料与试剂 粒毛盘菌(Lachnum hyalopus)YUM-50 ；基本发酵培养基；1%K3[Fe(CN)6]，三氯乙酸，三氯化铁，邻苯三酚，Vc溶液，过氧化氢，水杨酸，硫酸亚铁溶液，乙醇，DPPH溶液， Tris-HCL溶液（PH8.2）（配置：称取12.114gTris溶解至1L，然后取50ml再取22.9ml的0.1mol/LHCL溶液混合，混匀稀释至100ml） 0.2mol/LPBS(PH6.6)(配置：62.5ml的0.2mol/L磷酸二氢钠溶液与37.5ml的0.2mol/L磷酸氢二钠溶液） 1.1.2仪器与设备 DSX-280A灭菌锅，HH-S恒温水浴锅，TDL-50B离心机，AR1140型电子分析天平，722分光光度计，RE-85旋转蒸发仪，培养皿，烧杯，锥形瓶，试管，玻璃棒，移液管，酒精灯，量筒，接种针，容量瓶等实验室常用仪器。 1.2.实验方法 1.2.1粒毛盘菌发酵培养 在150mL的锥形瓶中，装入50mL的基本发酵培养基，用打孔器接入直径为3mm的已活化的菌块，25℃，150r/min摇床培养10d。离心除去发酵液，菌丝体用蒸馏水清洗三次后于60℃烘箱中干燥至恒重。 1.2.2多酚的提取 研磨干燥的菌丝体，过60目筛；精确称取5g于500mL锥形瓶中，加入300mL70%乙醇，在温度40℃，功率150W的条件下超声波提取30min后，醇沉过夜。抽滤除去多糖，取上清液真空旋转蒸发除去乙醇，再利用等体积乙酸乙酯萃取，加少量蒸馏水后，旋转蒸发除去乙酸乙酯，冷冻干燥后，得多酚粗品。 1.2.3多酚还原能力测定 取1ml样品溶液加入0.5ml1%K3[Fe(CN)6]和0.2ml 0.2mol/LPBS(PH6.6)于试管中50摄氏度水浴反应20min，取出后用流水进行冷却，