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3. 病毒分离鉴定 取急性期患者咽嗽液或鼻咽拭子,加抗生素处理后,放冰瓶内送实验室 接种鸡胚 接种培养细胞 七、预防与治疗 1、建立流感检测站,及时发现与隔离病人 2、预防接种 亚单位疫苗,70% protection. 抗流感病毒药物 金刚烷胺:M2阻滞剂 奥司米韦:可以抑制神经氨酸酶活性。 干扰素 中药:清热解毒 板蓝根、大青叶、连翘、鱼腥草,等 抗流感新药“达菲” 八角+大肠杆菌+炸药 莽草酸 30:1 葡萄糖 “达菲”成分中竟包含一种可爆炸物质、一种中国调味料以及一种无害的大肠杆菌。 八、兽医临床上常见的流感病毒 (一)禽流感 1.分类地位:正粘病毒科/甲型流感病毒属。 2.禽流感病毒一般特性 ① 球形,直径为80~120nm,但也常有同样直径的丝状形式,长短不一; ② 单股负股RNA,分8节段;螺旋对称核衣壳。 ③ 有囊膜,表面有10~12nm的纤突(H and N);H和N是囊膜表面的主要糖蛋白;具有型特异性和多变性,在病毒感染过程中起着重要作用。H决定病毒的致病性,能诱发感染宿主产生具有保护作用的中和抗体;N诱发的抗体无中和作用,但可减少病毒增殖;高致病性毒株主要是H5和H7。 3.禽流感病毒的培养 ① 常用:鸡胚(初次羊膜腔、适应后尿囊腔)及细胞培养(鸡胚成纤维细胞、原代猴肾细胞、MDCK、Vero); ② 有些毒株在鸽或其他细胞中培养后,对鸡的毒力减弱。 4、禽流感病毒来源及传播 水禽是禽流感病毒的主要贮藏库,水禽一般呈亚临床感染 ; 将水禽与家禽混合饲养非常容易将病毒引入家禽; 散养; 使用不能防止野鸟进入的禽舍 ; 存在多种禽鸟的市场也可能是病毒的主要来源. 猪是不同病毒基因重配的“混合器”或活载体, 是“禽-猪-人”种间传播链中的中间宿主 水禽和野生鸟类、鸥类 活禽市场 猪混合器 主要来自野生禽类(尤其是野生水禽)、受感染的家禽以及观赏鸟等。 禽流感的传播 可在感染的鸟类和禽群中持续存在数月 有多种传播途径 可通过污染的衣服、鞋、设施及鸟笼等传播 5.禽流感病毒的致病性 ① 引起各种类型的禽流感(Avian influenza,AI)。 ② 高致病性禽流感又称:真性鸡瘟、欧洲鸡瘟;OIE A类传染病,严重危害养禽业。 6.禽流感病毒的诊断 ① 病毒的分离与鉴定 采取病禽的呼吸道渗出物或器官组织,制成悬液,离心沉淀或过滤以去除组织碎屑;无菌悬液0.1-0.2mL尿囊腔接种10~11日龄鸡胚,35-37℃中培养。取鸡胚的尿囊液,以HA试验和HI试验鉴定病毒。 ② 血清学试验:禽流感病毒抗体的检测,这种抗体在感染后7d便可被检测出来。 用于血清学检查的方法有:HI试验(检测抗H抗体)、双向免疫扩散试验(检测抗NP抗体)、病毒中和试验、神经氨酸酶抑制试验、ELISA(酶联免疫吸附试验)以及琼脂扩散试验(AGP)等。通常是采取发病初期和康复期(发病后14~28d)的血清检测,若康复期血清抗体比发病初期升高4倍以上,则可证实禽流感的发生。 ③分子生物学诊断 RT-PCR 和Realtime RT-PCR 荧光RT-PCR、 RT-PCR-ELISA 依赖核酸序列的扩增技术(NASBA) 环介导的等温扩增技术(LAMP) 基因芯片技术 7.预防与控制 (二)猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV) (1)分类地位:正粘病毒科/甲型流感病毒属 (2)血清型:主要有H1N1、H3N2;近年来,从猪体内还分离到丙型流行性感冒病毒,但对猪不致病。 (3)抵抗力:流感病毒存在于病猪和带毒猪的呼吸道分泌物中,对热和日光的抵抗力不强,一般消毒药敏感。 (4)致病性:致猪的急性呼吸器官传染病——猪流行性感冒。 (5)微生物学检查:用灭菌的棉拭子采取鼻腔分泌物,放入适量生理盐水中洗涮,再加青霉素、链霉素处理;尿囊腔或羊膜腔接种10~12日龄鸡胚,35-37℃72~96h,收集尿囊液和羊膜腔液,以HA和HI试验鉴定病毒。 思考题 1.名词解释:抗原漂移、抗原转换; 2.叙述流感病毒的复制周期; 3.流感病毒疫苗为什么每年都要接种,试叙其机制。 A、B、C 3型没有共同抗原,都能感染人。 A型:感染范围广,家畜和家禽的流感都是由A型引起。常以流行的形式出现,发病急剧,蔓延迅速,危害很大。 B型:发现于1940年。能引起人的呼吸道感染,但流行规模比甲型流感病毒小得多。 C型:也是感染人的流感病毒。但极少引起流行。 多数流感病毒可在牛胚肾、鸡胚肾、猴胚肾和人胚肾细胞内增殖,但各毒株产生细胞病变的能力不同。 免疫预防 1、灭活疫苗 用感染鸡胚尿囊液制备福尔马林灭活疫苗,皮下或肌肉接种
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