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项目3：发酵技术生产生物药物任务1：发酵法生产白细胞介素 教学安排： 1. 员工培训 由老师讲解白细胞介素-2生产的理论基础。 分配实操任务：白细胞介素发酵生产。 2. 学生模拟组建运营一个白细胞介素-2生产企业，撰写计划书(在理论教学期间完成)。 市场部：白细胞介素-2的结构、功能、用途，白细胞介素-2市场状况与销售预测，竞争对手状况与分析。 技术部：确定白细胞介素-2生产的工艺流程及工艺参数，编制生产操作规程，确定生产车间的布局。 品控部：制定白细胞介素-2的质量标准，生产取样分析操作规程，质量检测标准和操作规程。 总经理：协调监督各部工作，最后拿出完整的计划书。 3. 计划书实施。 计划书要先经过老师的审核，然后实施。 实施过程中考核操作技能。 实施后及时进行实训报告的撰写也总结。 一　蛋白质类药物 1　蛋白质类激素 垂体蛋白激素和促性腺激素。 2　血浆白蛋白 3　蛋白质类细胞生长调节因子 　 4　黏蛋白。 5　胶原蛋白。 6　碱性蛋白质。 7　蛋白酶抑制剂。 二、生产用微生物的来源及发酵特性 1 大肠杆菌宿主菌特点 优点： 遗传背景清晰，容易培养； 缺点：形成包涵体；不能修饰蛋白。 表达形式 2 酵母宿主菌特性 优点：可对蛋白修饰；蛋白折叠正确； 缺点：生产较慢。 3 基因工程菌发酵控制要点 (1) 培养基 兼顾生长与外源基因表达。 (2)接种量 接种量适中，影响生长速度和迟滞期的长短。 (3) 温度 影响酶活性。 (4)溶解氧 维持较高DO值。 (5) 诱导时机 微生物生长旺盛后。 (6) pH 根据生长期与生产期的需求控制。 三、白细胞介素的结构与功能 Interleukin，简称IL。 目前批准上市的有IL-2、IL-6、IL-12等。 IL-2分子量为１４５００的糖蛋白，它刺激已被特异性抗原或致丝裂因数启动的Ｔ细胞增殖。重组白介素－２可用于临床研究。主要用于肾癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Ｒｏｓｓｅｎｂｅｒｇ）。ＬＡＫ细胞代表１个有单核巨噬细胞，Ｂ和Ｔ淋巴细胞特征的异原的细胞体。这些ＬＡＫ细胞似乎对癌细胞有特异作用。此外，ＬＡＫ细胞（不象Ｔ细胞）介导杀伤不受ＭＨＣ的约束。 四、生产工艺 1 工艺流程图 2 生产过程及工艺过程 (1)发酵 工程菌为大肠杆菌，温度敏感型。 种子用LB培养基； 发酵用M9CA培养基，30度10小时，后提高温度至42度，诱导3h。 (2) 分离纯化 包涵体制备 离心收集，菌体悬于EDTA溶液中，用超声波破碎细胞，后8000r/min离心，收集沉淀(包涵体和细胞碎片)。 包涵体洗涤及裂解： 用Tris-HCl洗涤3次，离心收集沉淀，用盐酸胍变性，离心收集上清液。 凝胶过滤及复性： 上清过Sephacryl S-200柱，醋酸液洗脱，收集洗脱峰。 干燥： 用冷冻真空干燥。 作业： 1 蛋白药物有哪些种类？ 2 大肠杆菌与酵母宿主菌各有何特点和表达类型？ 3 白细胞介素-2有何功能与用途？ 4 白细胞介素生产工艺如何？ * * 温度敏感型 乳糖诱导型 常用甲醇诱导型。 IL-2工程菌 斜面 摇瓶 发酵 制备包涵体 洗涤与裂解 凝胶过滤与复性 检定与包装 *