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* 第九章 紫外-可见分光光度法 第四节 紫外—可见分光 光度计 一、工作原理 二、基本组成 理解紫外-可见分光光度计的工作原理。 熟悉紫外-可见分光光度计的基本组成。 了解紫外-可见分光光度计的使用。 知识要求 2005年中央-12台曾报道,上海市的蔡女士一家刚住进新房没多久,丈夫就得了白血病去世。通过检测机构对室内的空气质量进行一次检测,发现储藏室和卧室中的甲醛含量竟然远远超出标准值的三倍。 国家标准《公共场所空气中甲醛测定方法》 (GB/T18204.26-2000) 第一法:酚试剂分光光度法 (仲裁法) 第二法:气相色谱法 课程引入 问题:为什么分光光度法能测定空气中甲醛的含量? 主要是由于空气中的甲醛与酚试剂反应生成嗪,嗪在酸性溶液中被高铁离子氧化形成蓝绿色化合物,可以对630nm的光产生选择性吸收,而可以建立相应的分析方法。 紫外-可见分光光度计: 紫外辐射: λ=200~400nm 可见光区: λ=400~760nm 紫外-可见分光光度计 采用一个可以产生多个波长的装置,通过分光装置, 得到一束平行的波长范围很窄的单色光,通过一定厚度的试样溶液后,部分光被吸收,剩余的光照射到光电元件上,产生光电流,在仪器上可读出相应的吸光度或透光率,完成测定。 定义: 单色光:只具有一种波长的光。 混合光 :两种以上波长组成的光。 朗博-比尔定律: 一、仪器的工作原理 国产分光光度计类型主要有:72、721、722和725等型。其基本构造主要由光源、单色器、吸收池、检测器和显示器五大部分组成。 二、仪器的基本组成 光源 单色器 样品池 检测器 显示器 图9-1 紫外-可见分光光度计基本结构示意图 ?/nm 钨灯(热辐射光源) 400 600 800 1000 氙灯(气体放电光源) 氢灯 强度 二、仪器的基本组成-光源 1、光源:发出所需波长范围内的连续光谱,有足够的光强度,稳定。 可见光区:钨灯,碘钨灯(320~1000nm)。 紫外区:氢灯,氘灯(180~375nm)。 氙灯:紫外、可见光区均可用作光源。 图9-2 光源的波长-强度关系图 氙灯 氢灯 钨灯 图9-3 紫外-可见分光光度计的光源 2、单色器:将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出一任波长单色光的光学系统。 二、仪器的基本组成-单色器 M1 M2 出射狭缝 图9-5 光栅衍射示意图 单色器主要由狭缝、色散元件和透镜系统组成。 图9-4 三棱镜分光 玻璃棱镜:可见光区 石英棱镜:紫外区、可见光区 入射狭缝 准直透镜 棱镜 聚焦透镜 出射狭缝 白光 红 紫 λ1 λ2 800 600 500 400 二、分光光度计的基本组成-单色器 色散元件是棱镜和反射光栅的组合。 狭缝和透镜系统控制光的方向。 图9-6 单色器光路示意图 3、 吸收池:又叫比色皿,用于盛放待测溶液和决定透光液层厚度的器件。 主要有石英吸收池和 玻璃吸收池两种。 玻璃池:可见光区。 石英池:紫外区或可见光区。 注意事项:手执两侧的毛面,盛放液体高度四分之三。 主要规格:0.5cm、1.0cm、2.0cm、3.0cm和5.0cm 二、分光光度计的基本组成-吸收池 图9-7 比色皿 4、检测器 利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号,常用的有光电管、光电倍增管、光电二极管、光电摄像管等,要求灵敏度高、响应时间短、噪声水平低、稳定性好的优点。 5、显示器 将检测器输出的信号放大并显示出来的装置。低档仪器,刻度显示;中高档仪器,数字显示,自动扫描记录。 二、仪器的基本组成-检测器、显示器 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 图9-8 72型分光光度计光学系统图 1-光源 2-进光狭缝 3,6-反光镜 4,7-透镜 5-棱镜 8-出光狭逢 9-比色皿 10-光量调节器 11-硒光电池 12-检流器 图9-9 UV-7504紫外-可见分光光度计 课后作业: 紫外-可见分光光度计的类型有哪些?哪些药物可用光度法进行含量测定? * *
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