基因工程乳酸菌表达载体的构建与应用.ppt

基因工程乳酸菌表达载体的构建与应用 研究院 穆熙军 1 2 pMG36e-GFP质粒电泳图 1.pMG36e-GFP 2.DL15000 Marker Subject 2 产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种重要的人兽共患病原菌，能引起动物坏死性肠炎(Necrotic enteritis, NE)、人类食物中毒等。 C perfringens是一种条件性致病菌，能产生多种致病作用的外毒素，其中α、β、ε和ι是主要的致死性毒素。 乳酸菌来源的细菌素一般称为乳酸菌素，分子量一般小于6KDa，能抑制或杀死食品中多数革兰氏阳性致病菌和腐败菌，少数乳酸菌素对革兰氏阴性菌有效，产生菌对其乳酸菌素具有自身免疫性。 有资料显示，乳酸菌片球菌属产生的细菌素对产气荚膜梭菌有抑菌活性。 TCTAGAATGAAAAAAATTGAAAAATTAACTGAAAAAGAAATGGCCAATATCATTGGTGGTAAATACTACGGTAATGGGGTTACTTGTGGCAAACATTCCTGCTCTGTTGACTGGGGTAAGGCTACCACTTGCATAATCAATAATGGAGCTATGGCATGGGCTACTGGTGGACATCAAGGTAATCATAAATGCTAGAAGCTT pMG36e载体图谱 pNZ8048载体图谱 1 2 3 4 5 6 7 pNZ8048-Pediocin转NZ9000菌液PCR电泳图 1-5 菌液PCR产物 6 DL2000 Marker 7 pNZ8048-Pediocin质粒扩增产物 pMG36e-Pediocin转化NZ9000菌液PCR筛选电泳图 1 阴性对照 2-12 菌液PCR产物 13 pMG36e-Pediocin质粒扩增产物 14 DL2000 Marker 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 Subject 3 产肠毒素性大肠杆菌 ETEC 鸡大肠杆菌病 鸡致病性大肠杆菌 APEC Fi mH 是1型菌毛特异性粘附素 新生仔猪大肠杆菌性腹泻 K88是仔猪腹泻的主要抗原 FimH/K88 DC诱导肽 融合表达 * 提供营养促进生长 维持肠道菌群平衡 刺激肠道免疫组织产生免疫球蛋白 降低动物血清胆固醇含量 促进小肠局部细胞免疫和体液免疫 乳酸菌 ＋ 嗜酸乳杆菌 SO7 乳酸乳球菌 TA4糖蛋白 球虫 乳酸乳球菌 棒状体蛋白1、膜蛋白P30 弓形虫 乳酸乳球菌 外膜蛋白OMPX 禽肠炎沙门氏菌 植物乳杆菌，乳酸乳球菌 PA 炭疽杆菌 乳酸乳球菌 外膜蛋白OprF/H 铜绿假单胞菌 乳酸乳球菌 黏附素FaeG 产肠毒素大肠杆菌ETEC 乳酸乳球菌 EspA 大肠杆菌O157:H7 乳酸乳球菌 V 鼠疫耶尔森菌 乳酸乳球菌 热休克蛋白A（hspA） 乳酸乳球菌 尿素酶UreB亚基 乳酸乳球菌 中性粒细胞激活蛋白NAP 乳酸乳球菌 黏附素alpA 幽门螺杆菌 乳酸乳球菌 HA1蛋白 禽流感病毒H5N1 干酪乳杆菌 VP2 猪细小病毒（PPV） 乳酸乳球菌 VP2 犬细小病毒CPV 乳酸杆菌，乳酸乳球菌 VP3 鹅细小病毒(GPv) 嗜酸乳杆菌 血凝素一神经氨酸酶(HN) 嗜酸乳杆菌 融合蛋白（F蛋白） 新城疫病毒NDV 乳酸乳球菌 S蛋白（ps420基因） 乳酸乳球菌 S 糖蛋白（COE基因） 流行性腹泻病毒（PEDV） 乳酸乳球菌，干酪乳杆菌 N蛋白 乳酸乳球菌，干酪乳杆菌 S蛋白 猪传染性胃肠炎病毒(TGEV) 嗜酸乳杆菌，乳酸乳球菌 VP4 嗜酸乳杆菌 VP7 猪源A组轮状病毒（PRV） 宿主菌 抗原名称 抗原来源（病原体） 表达抗原蛋白 …… 口服疫苗 表达细胞因子 乳酸乳球菌 大鼠 内皮抑素 乳酸乳球菌 人 人β-干扰素 干酪乳酸杆菌 人 白细胞介素-10 乳酸乳球菌 小鼠 白细胞介素-12 宿主菌 来源 细胞因子 乳酸乳球菌 化学合成 抗菌肽Bactenecin7 乳酸乳球菌 鸡肝 β-防御素 乳酸乳球菌 乳酸乳球菌HZL-NA Nisin—Apidaecin 乳酸乳球菌 乳酸乳球菌 Apidaecin 乳酸乳球菌 乳酸乳球菌AL2 乳链菌肽NisZ 乳酸乳球菌 乳酸乳球菌NIZO R5 乳链