食品中微生物的检测 方法.docxVIP

食品中微生物的检测方法 姓名 朱伟 班级 11生工2 学号 20110802233 摘要：随着食品工业的迅速发展，建立食品病原微生物的快速、方便、灵敏的检测方法对于食品质量控制和监管及人们健康有着重要的意义。本文简要论述了ATP检验法、螺旋接种法、电阻电导法等一系列方法，并着重讲述了现代的分子生物学检测方法，包括基因探针检测方法，PCR技术和基因芯片技术。 关键词：食品微生物；ELISA；ATP检验法；基因探针；PCR；基因芯片 前言 食品中的微生物有许多种类, 有的可导致人类产生疾病, 有的对人类无害, 也有的可产生一些不能令人忽视的代谢产物,因此食品中的微生物, 尤其是一些致病微生物常常是作为人类是否能够食用该食品的重要指标。特别是近年来随着环境污染的加剧和生态平衡的不断破坏, 可导致人类感染的致病菌的种类越来越多, 病原微生物对人类的威胁越来越大。在食品生产、加工、储存、运输、销售等各个环节中都有污染致病微生物的可能。一旦污染，微生物将大量繁殖而引起食品腐败变质，或导致食源性感染和食物中毒，对人们的危害极大，快速检验方法是社会的迫切需要。本文对中外食品中微生物的检测方法进行综述，以利于对食品进行的检测，达到预防食物中毒和肠道传染病的发生。 多年以来，对食品微生物的检测，通常采用琼脂平板培养法，共需2～3d [1]才能完成。这种依靠培养基进行培养、分离及生化鉴定的传统方法，既费时费力，又繁杂。也有为了能快速、方便、正确地检验食品微生物，近几年来，许多国家对此进行了研究，并取得了进展。快速检测及其自动化则是通过综合引用微生物学、化学、生物化学、生物物理学、免疫学以及血清学试验技术对微生物进行分离、检测、鉴定和计数，与传统方法比较，更快、更方便、更灵敏。 2.常用方法检测 2.1．显微镜镜检法 显微镜镜检法是比较常规的检测方法，一般观察微生物的形态和定量检测。主要步骤是(1)样品的处理：使用显微镜检测样品中的微生物浓度要高，因此，对于一般样品而言，一定要先富集后镜检。富集的方法一般采用膜过滤法，即把一定数量的样品经过膜过滤后把滤膜放在适量的无菌水中，摇动、振荡，然后检测无菌水中微生物的数量及形态。(2)镜检在洁净的载玻片上滴一滴准备好的菌液，盖上盖玻片，再滴一滴香柏油，使用油镜检测，也可用计数板计算微生物的数量，然后换算成需要的单位数量。 2.2.重量分析稀释计 重量分析稀释计是一种新仪器，能准确自动地制备样品稀释液，如当仪器指定的样品稀释比率为1：10时，它会自动吸取9份灭菌生理盐水和l份被检样品到同一容器中。大量实验表明， 结果的准确性在90％～100％之间。该仪器的稀释比率可在1：1～1：100之间任意调节。这种仪器消除了稀释和称量过程中的误差，节省时间，并省去了一些计算[2]。 自动旋转平板技术是在琼脂培养基表面倒一薄层样品，该仪器可使液体样品以螺旋转动方式分布，液体慢速流出后，随着平板的旋转从中心向边缘分布，样品分布非常均匀。这种方法可广泛用于细菌、酵母、霉菌及乳类样品中。样品倒人平板后，菌落数可以用激光菌落计数器来计数，即将光检测仪放置在仪器的底部，激光仪从上面自动扫描平板，当激光束通过菌落时，可以降低光的强度，从而检测出菌落的存在。这样菌落数可以通过电子计数，而不是传统的视觉计数。电子计数快而准确，与传统计数法得到的结果相近[3] 。 2.3.酶联免疫法(ELISA) 基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本(测定其中的抗体或抗原)和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故根据颜色反应的深浅给受检物质做定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具体条件，可设计出各种不同类型的检测方法[2,4,5]。 2.4.“干片” 法 “干片”法是利用无毒的高分子材料做培养基载体，快速、定性和定量检测试纸和胶片的食品微生物检测方法，集现代化学、高分子科学、微生物学于一体，已经达到作为定量常规法的水平。对有些项目的测定，几乎可与标准方法相媲美。如在欧美各国倍受青睐的“Petrimm”就是如此。由于其准确度和精确度高，可测定少量检品，不需